T载体PCR产物克隆试剂盒

详细内容

本试剂盒适用于克隆带有3＇-末端A突出的PCR产物的克隆。本试剂盒提供的独特连接系统允许用户在1小时的时间里完成连接反应。

本公司的pUCm-T载体是为简化PCR产物的克隆而设计的。许多高温DNA聚合酶，如Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等扩增的PCR产物在3＇-末端后都带有一个突出的碱基A，这样的PCR产物可以用3＇-末端后带有一个突出碱基T的载体方便地进行克隆。

pUCm-T是一种新颖的pUC系列T载体，其多克隆位点更多的单切点和β-半乳糖苷酶阅读框架的调整大大方便了克隆的蓝/白筛选。插入位点两端独特设计的两个PstI位点使插入片段可以用Pst I单酶切进行检测，也可以用非常廉价而高效的EcoR I和Hind III双酶切进行检测。可以用M13通用引物和T7启动子引物对PCR产物进行测序。pUCm-T含有T7 RNA聚合酶的启动子，可以对插入片段进行体外转录。

本说明结尾处列出了pUCm-T相关的技术资料，其全序列可参照pUC19（GenBank Accession Number M77789），只是其多克隆位点部分的序列有所不同.

保存：-20℃保存
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
异佛手柑内酯质量规格：HPLC≥98%，标准品Isobergapten  rabbitProstaglandinE1,PGE1ELISA试剂盒兔子列腺素E1(PGE1)ELISA试剂盒规格：96T/48T  大鼠白介素20(IL-20)试剂盒 Rat Ierleukin 20,IL-20 ELISA KIT

异甘草苷（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Isoliquiritin  小鼠白蛋白(albumin)ELISA试剂盒 ，英文名： albumin ELISA Kit  CLIAKitfoF(Humanansferfactor)ELISAKit人转移因子规格：48T/96T

雷马曲班质量规格：>98%,BRRamatroban;BAY u3405  大鼠红细胞生成素(EPO)ELISA检测试剂盒RatErythropoietin,EPOELISAKit 96T/48T  人体E-Cadherin基因甲基化检测试剂盒20

异钩藤碱(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Isorhynchophylline  人S100钙结合蛋白A6/钙粒蛋白A(S100A6)试剂盒 Human S100A6 ELISA Kit  ELISAKitATMA/TMAB人抗甲状腺微粒体抗体规格：48T/96T
载玻片细胞组蛋白NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  13241-33-3新橙皮苷说明书  Neohesperidin

Mousealpha-feroteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2ELISA试剂盒小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)ELISA试剂盒规格：96T/48T  13241-28-6大黄酚-8-O-葡萄糖苷品牌  Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside

小鼠载脂蛋白A4(APOA4)ELISA试剂盒 ，英文名： APOA4 ELISA Kit  三七总皂苷规格  Panax notoginsenosides

巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA检测试剂盒MonkeyMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISAKit 96T/48T  133-05-1细辛脂素厂家  Asarinin

犬甲状腺素(T4)试剂盒 Canine thyroxine,T4 ELISA Kit  126-17-0澳洲茄胺说明书  Solasodine
T载体PCR产物克隆试剂盒15291-75-5银杏内酯A规格  Ginkgolide A  英文名称RatHIF-1αELISAKit大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)规格：96T/48T

152743-19-6石吊兰素品牌  Lysionotin  英文名称RatHIF-1αELISAKit大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)规格：96T/48T

152743-19-6石吊兰甲素品牌  Lysionotin   英文名称Rathemeoxygenase-2ELISAKit大鼠血红素氧合酶2(HO-2)规格：96T/48T

14937-32-71,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖品牌  1,2,3,4,6-pentagalloylglucose   英文名称Rathemeoxygenase-2ELISAKit大鼠血红素氧合酶2(HO-2)规格：96T/48T

14937-32-71,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖品牌  1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose   英文名称Rathemeoxygenase-1ELISAKit大鼠血红素氧合酶1(HO-1)规格：96T/48T

更新时间：2024/5/16 10:55:09

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