详细内容
本试剂盒适用于克隆带有3'-末端A突出的PCR产物的克隆。本试剂盒提供的独特连接系统允许用户在1小时的时间里完成连接反应。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
T载体PCR产物克隆试剂盒 | T Vector PCR Products Cloning Kit | 20次|100次 |
本公司的pUCm-T载体是为简化PCR产物的克隆而设计的。许多高温DNA聚合酶,如Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等扩增的PCR产物在3'-末端后都带有一个突出的碱基A,这样的PCR产物可以用3'-末端后带有一个突出碱基T的载体方便地进行克隆。
pUCm-T是一种新颖的pUC系列T载体,其多克隆位点更多的单切点和β-半乳糖苷酶阅读框架的调整大大方便了克隆的蓝/白筛选。插入位点两端独特设计的两个PstI位点使插入片段可以用Pst I单酶切进行检测,也可以用非常廉价而高效的EcoR I和Hind III双酶切进行检测。可以用M13通用引物和T7启动子引物对PCR产物进行测序。pUCm-T含有T7 RNA聚合酶的启动子,可以对插入片段进行体外转录。
本说明结尾处列出了pUCm-T相关的技术资料,其全序列可参照pUC19(GenBank Accession Number M77789),只是其多克隆位点部分的序列有所不同.
保存:-20℃保存
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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异甘草苷(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Isoliquiritin 小鼠白蛋白(albumin)ELISA试剂盒 ,英文名: albumin ELISA Kit CLIAKitfoF(Humanansferfactor)ELISAKit人转移因子规格:48T/96T
雷马曲班质量规格:>98%,BRRamatroban;BAY u3405 大鼠红细胞生成素(EPO)ELISA检测试剂盒RatErythropoietin,EPOELISAKit 96T/48T 人体E-Cadherin基因甲基化检测试剂盒20
异钩藤碱(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Isorhynchophylline 人S100钙结合蛋白A6/钙粒蛋白A(S100A6)试剂盒 Human S100A6 ELISA Kit ELISAKitATMA/TMAB人抗甲状腺微粒体抗体规格:48T/96T
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14937-32-71,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖品牌 1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose 英文名称Rathemeoxygenase-1ELISAKit大鼠血红素氧合酶1(HO-1)规格:96T/48T
更新时间:2024/2/5 9:17:24
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