详细内容
储存条件:冷冻(-20℃)
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
高效感受态细胞制备试剂盒 | High-efficiency Competent Cell Preps Kit | 40/PK|200/PK |
概述
本试剂盒制备的感受态细胞在进行转化时无需经过热激步骤,对于Ampicillin抗性质粒而言,甚至连活化步骤都可以省略,感受态细胞和DNA混合后即可直接涂布,大地简化了转化过程,提高了实验效率。用该试剂盒制备的DH5α细胞使用pUC19质粒DNA转化,转化率可以达到107~109 cfu/μg DNA,对其他常用的工程菌株和质粒也同样适用。
特点
转化过程无需热激。
感受态制备流程快速简单,适合大量制备。
使用感受态用培养基,转化效率高。
应用
感受态细胞制备、转化
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
异型南五味子丁素(标准品)质量规格:含量测定heteroclitin D HumanHighdensitylipoprotein,HDLELISA试剂盒人高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒规格:96T/48T 大鼠软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA试剂盒 ,英文名: COMP ELISA Kit
紫苏醛(标准品)质量规格:含量测定(-)-PERILLALDEHYDE 组织色素含量比色法定量检测试剂盒20 人叉头框蛋白01(FoxO1)ELISA检测试剂盒HumanforkheadboxO1,FOXO1ELISAKit 96T/48T
相思子碱(标准品)质量规格:供鉴别用L-ABRINE Humanlupusaicoagula,LAC/LAELISAKit人狼疮抗凝抗体(LAC/LA)ELISA试剂盒规格:96T/48T 植物维生素E(VE)试剂盒 Pla Vitamin E,VE EELISA Kit
6'-羟甲基辛伐他汀质量规格:美国进口6'-Hydroxymethyl Simvastatin 人脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 CLIAKitforPL/Fbn(Humanplasmin/fibrinolysin)ELISAKit人纤溶酶/纤维蛋白溶酶规格:48T/96T
化线粒体NADH氧化酶活性定量检测试剂盒20 麦冬皂苷O-4规格 glycoside O-4
RatInsulin,INSELISA试剂盒大鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒规格:96T/48T 1111088-89-114α-羟基SprengerininC厂家 14α-hydroxy Sprengerinin C
小鼠再生胰岛衍生蛋白1β(REG1β)ELISA试剂盒 ,英文名: REG1β ELISA Kit 去乙酰基OphiopojaponinA说明书 deacetyl ophiopojaponin A
猴可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA检测试剂盒MonkeySolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISAKit 96T/48T 薯蓣皂苷元-3-O-β-D-木糖-(1→3)-β-D-葡萄糖苷品牌 diosgenin-3-O-β-D-xylosyl-(1→3)-β-glucoside
犬巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)试剂盒 Canine Macrophage-Derived Chemokine,MDC/CCL22 ELISA Kit 3-O-α-L-鼠李糖-(1→2)-β-葡萄糖麦冬甙元规格 Ophiogenin-3-O-α-L-rhamnosyl-(1→2)-β-D-glucoside
高效感受态细胞制备试剂盒20261-38-5银杏酸(C13:0)厂家 Ginkgolic Acid (C13:0) 英文名称RaoninIELISAKit大鼠心肌肌钙蛋白I(cTnI)ELISA试剂盒规格:96T/48T
20183-47-5细叶远志皂苷说明书 Tenuifolin 英文名称RatNoradrenalinELISAKit大鼠去甲(Noradrenalin)规格:96T/48T
201-482-7豆甾醇厂家 Stigmasterol 英文名称RatNoradrenalinELISAKit大鼠去甲(Noradrenalin)规格:96T/48T
20137-37-5铁冬青酸品牌 Rutundicacid 英文名称RatNOELISAKit大鼠(NO)ELISA规格:96T/48T
2009-24-7花椒毒酚规格 Xanthotoxol 英文名称RatNN-T4ELISAKit大鼠新生甲状腺素(NN-T4)规格:96T/48T
更新时间:2024/3/29 16:18:48
留言框 | |
感兴趣的产品: | * |
您的单位: | * |
您的姓名: | * |
联系电话: | * |
详细地址: | |
常用邮箱: | |
您的任何要求、意见或建议: * |
|
验证码: | * |
请输入要搜索的关键词
上海谷研实业有限公司:elisa试剂盒,细胞,标准品,菌种
地址:上海市嘉定区嘉罗公路1661号23号楼311 电话:021-39596320 传真: 技术支持:阿仪网 总访问量:3021641