pET-Dual-N-GST-PreScission质粒

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pET-Dual-N-GST-PreScission是一种用于在中高效共表达两种目的蛋白的质粒，其中一种可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag,GST tag)并且GST标签后有PreScission蛋白酶的酶切位点。本质粒包含两个多克隆位点(MCS)，每个多克隆位点都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点(rbs)，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。

在共表达两个蛋白的复合物时，通常宜把较难表达的基因克隆到个多克隆位点，宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化，可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物。本质粒的N端GST标签与个多克隆位点之间有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP，对应核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，配合使用我司生产的PreScission Protease(货号：YT982)4℃酶切过夜，第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物，这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然，本质粒也可以只在个多克隆位点插入目的基因，这样就会仅表达一个含有N端GST标签和PreScission识别位点的目的蛋白。

使用说明：

1．次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。

2．100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。

3．pET-Dual-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
吲哚-4-羧酸甲酯(>98%，BR)质量规格：>98%，BRMethyl indole-4-carboxylate  ELISAKitLyme-IgG人莱姆IgG规格：48T/96T  RatCaveolin-1,Cav-1ELISAKIT 大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

甲基绿(~65%,BS)质量规格：~65%,BSMethylene green zinc chloride double salt  小鼠Ⅵ型胶原α1(COL6α1)ELISA试剂盒 ，英文名： COL6α1 ELISA Kit  CLIAKitforHpt/HPELISAKit大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白规格：48T/96T

亚甲紫3RAX(>90%，BS)质量规格：>90%，BSMethylene violet 3RAX  人雄激素结合蛋白(ABP)ELISA检测试剂盒HumanAndrogenBindingProtein,ABPELISAKit 96T/48T  细胞PAK2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20

2-甲基琥珀酸(>98%,BR)质量规格：>98%,BRMethylsuccinic acid  大鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)试剂盒 Rat Pulmonary surfacta-associated protein A,SP-A ELISA Kit  β2-GP1IgA/G/M大鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M规格：48T/96T
小鼠粘蛋白2(MUC2)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC2 ELISA Kit  552-59-0樱黄素说明书  Prunetin

白三烯C4(LTC4)ELISA检测试剂盒MonkeyLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit 96T/48T  491-80-5鹰嘴豆芽素A品牌  Biochanin A

犬球蛋白A(IgA)试剂盒 Canine Immunoglobulin A,IgA ELISA Kit  509-18-2硬飞燕草碱规格  Belsoline

英文名称HumanPlatelet-DerivedGrowthFactorELISAkit人血小板源性生长因子(PDGF-AB)规格：96T/48T  10236-47-2柚皮苷厂家  naringin

化微粒体1脂酶D2(PhospholipaseD2)活性荧光定量检测试剂盒20  480-41-1柚皮素说明书  Naringenin
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒25459-91-0去亚甲基小檗碱规格  Demethyleneberberine    英文名称RatT4ELISAKit大鼠高敏甲状腺素(T4)规格：96T/48T

25406-64-8莫诺苷品牌  Morroniside   英文名称RatT4ELISAKit大鼠高敏甲状腺素(T4)规格：96T/48T

24939-17-1去甲氧基姜黄素规格  Demethoxycurcumin  英文名称RatT3ELISAKit大鼠三甲状腺原氨酸(T3)ELISAKit规格：96T/48T

24699-16-9异芒果苷厂家  Isomangiferin   英文名称RatT3ELISAKit大鼠三甲状腺原氨酸(T3)ELISAKit规格：96T/48T

24697-74-3盐酸益母草碱说明书  Leonurine   英文名称RatsubstancePreceptorELISAKit大鼠P物质受体(SP-R)规格：96T/48T

更新时间：2024/3/5 9:56:44

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