pUC18 SARS-CoV-2 ORF1ab质粒

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pUC18 SARS-CoV-2 ORF1ab质粒所克隆的ORF1ab(168bp)含有中国疾控中心所公布的SARS-CoV-2冠状病毒基因组中开放读码框ORF1ab(open reading frame 1ab，ORF1ab)荧光检测RT-PCR特异性引物(1ab-F:5＇-CCCTGTGGGTTTTACACTTAA-3＇；1ab-R:5＇-ACGATTGTGCATCAGCTGA-3＇，该对引物扩增产生119bp片段)扩增所包含区域，该克隆适用于SARS-CoV-2的特异性检测。

SARS-CoV-2 ORF1大约占整个基因组长度的三分之二，位于病毒基因组5＇端，编码病毒复制酶，包括ORF1a和ORF1b。ORF1a和ORF1b分别编码两个多聚蛋白(poly-protein)即pp1a和pp1ab，多聚蛋白产生后，被病毒编码的类胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin-like protease，3CLpro)或1-2个类木瓜蛋白酶(papain-like protease，PLP)水解为具有独立生物学功能的十六个非结构蛋白(NSP1-NSP16)，其中ORF1a编码NSP1-NSP11，而ORF1b编码NSP12-16。

使用说明：

次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。

100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切。
荧光素钠Fluorescein di salt质量规格：BS  载玻片细胞钙ATP酶SERCA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  HumanIerleukin5,IL-5ELISAKIT 人白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

D-虫荧光素钠盐;D-荧光素钠盐D-Luciferin  salt质量规格：>98%  Mouseacetylcholine,ACHELISA试剂盒小鼠乙酰胆碱(ACH)ELISA试剂盒规格：96T/48T  HumanNOD-likereceptor9,NLRELISA试剂盒人NOD样受体(NLR)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2ˊ,7ˊ-二氯荧光素钠盐2＇,7＇-Dichlorofluorescein  Salt 质量规格：>98%  小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC5B ELISA Kit  ELISAKitapo-A1猪载脂蛋白A1规格：48T/96T

盐酸酪胺Tyramine 质量规格：>97%,BR  小鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA检测试剂盒MousehighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 96T/48T  Humanfarnesyl-diphosphatefarnesylansferase1,FDFT1ELISAKit人法尼基二1酸法尼基转移酶1(FDFT1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
犬内皮型合成酶(eNOS)试剂盒 Dog Endothelial niic oxide syhase,eNOS ELISA Kit  97747-88-1盐酸川芎嗪规格  Ligustrazine

英文名称HumanInsulin-likegrowthfactor2,IGF-IIELISAKit人胰岛素样生长因子2(IGF-2)规格：96T/48T  104112-82-5盐酸黄柏碱厂家  Phellodendrine chloride

化人体RUNX3基因重组表达载体(pGEFP-RUNX3)10微克  6020-18-4盐酸黄连碱说明书  Coptisine chloride

Rathydroxyproline,HypELISA试剂盒大鼠羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒规格：96T/48T  6080-33-7盐酸青藤碱品牌  Sinomenine

小鼠整合素αM(Itgam/CD11b)ELISA试剂盒 ，英文名： Itgam/CD11b ELISA Kit  2188-68-3盐酸石蒜碱规格  Lycorine chloride
pUC18 SARS-CoV-2 ORF1ab质粒30220-46-3巨大戟醇厂家  Ingenol   荧光定量PCR分析20样本

30197-14-9去氧土大黄苷厂家  Deoxyrhapontin   荧光标记法细胞端粒酶活性AP电泳分析试剂盒10

30045-16-0脱氢紫堇碱品牌  Dehydrocorydaline   英文名称抗胰岛细胞抗体规格：96T/48T

30045-16-0脱氢紫堇碱厂家  Dehydrocorydaline   英文名称抗胰岛素自体抗体规格：96T/48T

3，6-二芥子酰基蔗糖说明书  3,6’－Disinapoyl sucrose   英文名称核糖体、P抗体、IgG/M/A规格：96T/48T
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

更新时间：2024/5/7 9:23:47

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