ET12567/pUZ8002菌种

详细内容

ET12567(pUZ8002)主要用来进行链霉菌基因操作，是链霉菌基因敲除或者基因倍增通用的菌株。本产品可用于常规和链霉菌转化、结合等实验，具体步骤请见分子克隆手册等工具书。

产品特点

携带pUZ8002质粒，此质粒的tra基因编码转移蛋白Tra，使得质粒DNA能从转移到链霉菌。

是甲基化缺陷型，故其转移的质粒DNA不会被大部分有甲基修饰系统的链霉菌降解。如果链霉菌受体菌不含甲基化修饰系统，则也可以使用DH5a(pUZ8002)菌作为供体菌。

培养时需要加入25μg/mL氯霉素和25μg/mL卡那霉素以维持细胞内pUZ8002伴侣质粒的存在。

跟ET12567(pUZ8002)兼容的质粒是pSET152和pKC1139。

保存：-80℃，有效期一年。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
硬脂酸(Standard for GC,>99%(GC))质量规格：Standard for GC,>99%(GC)Stearic acid  RatTumornecrosisfactorβ,TNF-βELISAKit大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒规格：96T/48T  人P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

环丁砜(标准品)质量规格：分析标准品,≥99.8% (GC)Sulfolane  Murashige&Skoog完全培养基500毫升溶液/片剂 兔子Ⅲ型胶原氨基端肽(PⅢ)试剂盒 Rabbit procollagen Ⅲ N-terminal peptide,PⅢ ELISA Kit

环丁砜(Standard for GC,≥99.5%(GC))质量规格：Standard for GC,≥99.5%(GC)Sulfolane  PorcineFollicle-stimulatinghormone,FSHELISA试剂盒猪促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒规格：96T/48T  去乙酰化饥饿激素(dGHRL)ELISA试剂盒 ，英文名： dGHRL ELISA Kit

十四烷(Standard for GC,>99%(GC))质量规格：Standard for GC,>99%(GC)Tetradecane  小鼠核因子κB(NF-Kb)ELISA试剂盒 ，英文名： NF-Kb ELISA Kit  RabbitB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2ELISA试剂盒兔子B细胞瘤因子2(Bcl-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
载玻片细胞βCOLLAGENI蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  1354-84-3雪上一枝蒿甲素说明书  Bullatine A

Mouse8-Hydroxy-desoxyguanosine,8-OHdGELISA试剂盒小鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒规格：96T/48T  466-26-2雪上一枝蒿乙素品牌  BullatineB

小鼠整合素β3(ITGβ3)ELISA试剂盒 ，英文名： ITGβ3 ELISA Kit  5578-73-4血根碱规格  Sanguinarine

内皮素1(ET-1)ELISA检测试剂盒MonkeyEndothelin1,ET-1ELISAKit 96T/48T  盐酸血根碱厂家  Sanguinarine Chloride

犬脑素/脑尿肽(BNP)试剂盒 Canine brain naiuretic peptide,BNP ELISA Kit  148244-82-0亚麻木酚素说明书  Secoisolariciresinol Diglucoside
ET12567/pUZ8002菌种31008-19-2辛夷脂素厂家  Fargesin   鱼类白介素1α(IL-1α)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

31008-18-1木兰脂素规格  Magnolin    鱼骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA检测试剂盒FishOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAkit 96T/48T

30964-13-71,5-二咖啡酰奎宁酸说明书  1,5-Dicaffeoylquinic acid   鱼肝油维生素A含量荧光定量检测试剂盒20

3081-61-6L-茶氨酸规格  L-Theanine   游离脂肪酸化学比色法定量检测试剂盒50

306-08-1高香草酸说明书  Homovanillic acid   油脂DNA萃取试剂盒10

更新时间：2024/4/23 13:54:31

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