CodonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞

详细内容

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株来源于BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充缺乏的4种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA)对应的tRNA(argU、ileY、proL、leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。

该菌株染色体整合了λDE3区(DE3区含有T7RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，氯霉素，链霉素，壮观霉素抗性。

BL21-Codon Plus(DE3)-RIPL感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。

保存条件：-80℃

基因型：

F–ompT hsdS(rB–mB–)dcm+ Tetr galλ(DE3)endA Hte [argU proL Camr] [argU ileY leuW Strep/Specr]

操作说明：

1.取100μl冰上融化的BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.感受态细胞好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5.为获得需要量的蛋白，佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
硬脂酸铝Aluminum stearate质量规格：AR  组蛋白H3-K79乙酰化检测试剂盒10/20等 口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

铋试剂III(>99%,BR)Bismuth(III) nitrate pentahydrate质量规格：>99%,BR  Mouseai-Monocyteaibody,AMAELISA试剂盒小鼠抗单核细胞抗体(AMA)ELISA试剂盒规格：96T/48T  Humanpeptidylprolylisomerase(cyclophilin)-like1,PPIL1ELISA试剂盒人肽酰脯氨酰异构酶(亲环蛋白)样1(PPIL1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1酸氢钙二水(>98%,BR)Calcium phosphate, dibasic, dihydrate质量规格：>98%,BR  小鼠胰腺再生蛋白Ⅳ(REG4)ELISA试剂盒 ，英文名： REG4 ELISA Kit  ELISAKitDAO猪氧化酶规格：48T/96T

碳酸铈Cerium(III) carbonate, hydrate质量规格：>99.9%,AR  兔子Ⅲ型胶原肽(PⅢNP)ELISA检测试剂盒rabbitN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 96T/48T  HumandipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISAKit人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Ratalcoholdehydrogenase,ADHELISAKit大鼠乙醇脱氢酶(ADH)ELISA试剂盒规格：96T/48T  133-04-0细辛脂素厂家  Asarinin

载玻片细胞αSMA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  20183-47-5细叶远志皂苷说明书  Tenuifolin

Mouse5-Nucleotidase,5-ELISA试剂盒小鼠5核苷酸酶(5-)ELISA试剂盒规格：96T/48T  51938-32-0夏佛塔苷品牌  Schaftoside

小鼠脂蛋白关联1脂酶A2(LpPLA2)ELISA试剂盒 ，英文名： LpPLA2 ELISA Kit  55576-66-4仙鹤草酚B规格  Agrimol B

基质金属蛋白酶11(MMP11)ELISA检测试剂盒Monkeymaixmetalloproteinase11,MMP11ELISAKit 96T/48T  85643-19-2仙茅苷厂家  Curculigoside
CodonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞340963-86-2辽东楤木皂苷V厂家  Araloside V   载玻片细胞CASPASE-7蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20

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33783-82-3HederacolchisideE说明书  Hederacolchiside E   载玻片细胞CASPASE-2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20

33570-04-6白果内酯厂家  Bilobalide   载玻片细胞CASPASE-10蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20

更新时间：2024/3/11 9:57:12

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