Rosetta(DE3)化学感受态细胞

详细内容

Rosetta(DE3)感受态细胞具有氯霉素抗性，补充缺乏的6种稀有密码子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA)对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平，该菌株染色体整合了λDE3区(DE3区含有T7RNA聚合酶)，同时表达T7 RNA聚合酶和RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。

Rosetta(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。

保存条件：-80℃

基因型：

F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)pRARE(argU，argW，ileX，glyT，leuW，proL)(CamR)

操作说明：

1.取100μl冰上融化的Rosetta(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
硬脂酸镁Magnesium stearate质量规格：BR  小鼠足盂蛋白(PCX)ELISA试剂盒 ，英文名： PCX ELISA Kit  组织样品组织型纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)活性荧光定量检测试剂盒20

孔雀石绿盐酸盐(>90%,BS)Malachite green 质量规格：>90%,BS  猫细小病毒抗体(FPV)ELISA检测试剂盒Felisparvovirus,FPVELISAKit 96T/48T  Humangrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin，GHRP-GhrelinELISAKit人生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒规格：96T/48T

无水硫酸锰(>98%,BR)Manganese (II )sulfate anhydrous质量规格：>98%,BR  犬血清淀粉样蛋白A2(SAA2)试剂盒 Canine serum amyloid A2,SAA2 ELISA Kit  人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

丙硫异烟胺Prothionamide质量规格：>98.5%,BR  英文名称MouseAILR3ELISAKIT小鼠AILR3规格：96T/48T  猪凝血因子Ⅶ(FⅦ)试剂盒 Pig coagulation factor Ⅶ,FⅦ ELISA Kit
载玻片细胞βAMYLOID蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  豨莶甲素规格  orientalinA

Mouse6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISA试剂盒小鼠6同列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA试剂盒规格：96T/48T  豨莶乙素厂家  orientalinB

小鼠脂蛋白相关1脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA试剂盒 ，英文名： Lp-PL-A2 ELISA Kit  豨莶酸说明书  Siegesbeckicacid

小鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA检测试剂盒MouseHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT 96T/48T  豨莶酸品牌  siegesmethyethericacid

人巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)试剂盒 Human MIP-3β ELISA kit  5940-00-1豯莶精醇规格  Darutigenol
Rosetta(DE3)化学感受态细胞343-27-1盐酸去氢骆驼蓬碱规格  Harmine    载玻片细胞CDK6蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20

34271-54-0茶氨酸规格  Theanine   载玻片细胞CDK4蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20

34221-41-5刺甘草查尔酮品牌  Echinatin   载玻片细胞CDK3蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20

34157-83-0雷公藤红素品牌  Celastrol  载玻片细胞CDK2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20

340982-22-1辽东楤木皂苷VII品牌  Araloside VII   载玻片细胞CASPASE-9蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

更新时间：2024/4/7 10:07:28

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