TB1化学感受态细胞

详细内容

TB1感受态细胞来源于JM 83，是JM 83 hsdR型，只含有RNApolymerase，缺少BL21(DE3)菌株的T7 RNA polymerase，适合pMAL系列质粒原核蛋白表达(The pMAL vectors use the E.coli RNA polymerase)，不能用于pET系列质粒的表达，具有链霉素抗性。

TB1感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。

保存条件：-80℃

基因型：

F– ara Δ(lac-proAB)rpsL(Strr)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR

操作说明：

1.取100μl冰上融化的TB1感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.感受态细胞好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5.为获得需要量的蛋白，佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
优真空泵油(Viscosity Grade 46)Vacuum pump oil质量规格：Viscosity Grade 46  人甲状腺素抗体试剂盒 Human Thyroxine aibody ELISA Kit  人水通道蛋白2(AQP-2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

优真空泵油(Viscosity Grade 68)Vacuum pump oil质量规格：Viscosity Grade 68  RatAquaporin5,AQP-5ELISAKit大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA试剂盒规格：96T/48T  小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)试剂盒 Mouse histon-H2b ELISA Kit

腺苷3＇,5＇-环单1酸盐，N6-苯甲酰-钠盐Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphate, N6-Benzoyl-,  Salt  质量规格：美国进口 组蛋白H4-乙酰化检测试剂盒10/20等 猪圆环病毒通用型(PCV-U)核酸检测试剂盒 48T

腺苷 2＇:3＇-环单1酸盐钠盐Adenosine 2＇:3＇-cyclic monophosphate  salt 质量规格：美国进口  MouseAi-ypsin,ATELISA试剂盒小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒规格：96T/48T  HumanPhosphoglucomase,PGMELISA试剂盒人1酸葡萄糖变位酶(PGM)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Ratadrenomedullin,ADMELISAKit大鼠肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒规格：96T/48T  82508-31-4土槿皮乙酸品牌  Pseudolaric Acid B

载玻片细胞TUBULIN蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  546-43-0土木香内酯规格  Alantolactone

Mouse50%complemehemolysis,CH50ELISA试剂盒小鼠血清总补体(CH50)ELISA试剂盒规格：96T/48T  5289-74-7蜕皮激素厂家  Ecdysterone

小鼠脂多糖(LPS)ELISA试剂盒 ，英文名： LPS ELISA Kit  73-31-4褪黑素说明书  Melatonin

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(AIL-R3)ELISA检测试剂盒Monkeytumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AIL-R3ELISAKit 96T/48T  30045-16-0脱氢紫堇碱品牌  Dehydrocorydaline
TB1化学感受态细胞3681-93-4牡荆素规格  Vitexin   载玻片细胞MYC蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20

366814-42-8苦苏花皂苷C规格  Cussosaponin C   载玻片细胞MAPK蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20

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更新时间：2023/12/27 9:28:37

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