OverExpress C43(DE3)化学感受态细胞

详细内容

OverExpress C43(DE3)、OverExpress C41(DE3)两个菌株均起源于BL21(DE3)，其优点是可以高效表达毒性蛋白或疏水性蛋白。

OverExpress C41(DE3)跟 BL21(DE3)的区别在于其基因组含有至少一个未知突变，这个未知突变使其获得了高效表达毒性蛋白(1-5)的能力，此突变位点参与表达毒性蛋白时的细胞死亡途径；OverExpress C43(DE3)来源于OverExpress C41(DE3)，是通过筛选 OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株获得。

OverExpress C43(DE3)菌株具有比OverExpress C41(DE3)更强的表达毒性蛋白和疏水性蛋白的能力，所以说OverExpress C43(DE3)菌株与BL21(DE3)相比拥有至少两个未知突变，正是这两个未知突变使其获得了更广泛的表达毒性蛋白或疏水性蛋白的能力。此菌株含有DE3区，可同时表达T7 RNA聚合酶和RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。

OverExpress C43(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达5×108 cfu/μgDNA。

保存条件：-80℃

基因型：

F–ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)

操作说明：

1.OverExpress C43(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2.42℃水浴热激45，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生 素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.感受态细胞好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5.为获得需要量的蛋白，佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化.-
油酸（标准品） Oleic acid质量规格：分析标准品,≥99.0%(GC)  肠出血性大肠埃希菌(EerohaemorrhagicE.coli)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20  Humanbasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISAKit 人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

反式-9-十八烯酸甲酯（标准品）trans-9-Octadecenoic methyl ester质量规格：分析标准品  RatFreei-iodothyronineIndes,Free-T3ELISA试剂盒大鼠游离三甲状腺原氨酸(Free-T3)ELISA试剂盒规格：96T/48T  Humanmaturationpromotingfactor,MF/MPFELISA试剂盒人促有丝分裂因子(MF/MPF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

对位红（标准品） Para Red质量规格：分析标准品,用于食品分析 小鼠组胺H4受体(HRH4)ELISA试剂盒 ，英文名： HRH4 ELISA Kit  组织样品组织蛋白酶S(CATHEPSINS)活性荧光定量检测试剂盒20

岩芹酸（标准品）Petroselinic acid质量规格：分析标准品,>99%(GC)  山羊白介素2受体(IL-2R)ELISA检测试剂盒GoatIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit 96T/48T  Humangrowth-regulatedoncogeneα/melanomagrowthstimulatingactivity,GROα/MGSAELISAKit人生长调节致癌基因α/素瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
化大鼠肾上腺髓质素(AM)基因重组表达载体(pGEFP-AM)10微克  64849-39-4甜叶悬钩子苷说明书  Rubusoside

RatHistoneDeacetylase,HDELISA试剂盒大鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒规格：96T/48T  20137-37-5铁冬青酸品牌  Rutundicacid 

小鼠脂多糖/内(LPS)ELISA试剂盒 ，英文名： LPS ELISA Kit  191729-45-0通关藤苷H规格  Tenacissoside H

小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA检测试剂盒Mouseα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit 96T/48T  928151-78-4通关藤苷F厂家  Tenacissoside F

人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)试剂盒 Human MIF ELISA Kit  191729-44-9通关藤苷I说明书  Tenacissoside I
OverExpress C43(DE3)化学感受态细胞37271-16-2番泻苷C厂家  Sennoside C   载玻片细胞P16蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20

36948-76-2千层纸素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷厂家  Oroxyloside   载玻片细胞P16蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20

3681-99-0葛根素品牌  Puerarin   载玻片细胞NFKAPPABP65蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20

3681-99-0葛根素厂家  Puerarin   载玻片细胞NFKAPPABP50蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20

3681-93-4牡荆素品牌  Vitexin  载玻片细胞NFKAPPABP50蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

更新时间：2024/4/3 10:03:47

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