F-BL21(DE3)化学感受态细胞

详细内容

BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有T7启动子的表达载体(如 pET系列)的基因。

λDE3区含有T7RNA聚合酶，该区整合于BL21的染色体上，所以称为BL21(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。F-BL21(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内完成转化、涂板操作，pUC19质粒检测转化效率可达1×107 cfu/μg DNA。

保存条件：-80℃

基因型：

F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)

快速转化操作方法(10min)：

1.提10分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。

2.F-BL21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置5分钟。

3.用200 μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。

4.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

快速热激转化操作方法(25min,可提高转化效率)

1.F-BL21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。

2.42℃水浴热激45，迅速放回冰上并静置2分钟(晃动会降低转化效率)。加入700 μl不含抗生素的LB，37℃，200 rpm复苏10分钟，涂板(均匀，表面无水渍)。

3.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
莠灭净（标准品）质量规格：分析标准品,98.8%Ametryn  英文名称MouseDHEAELISAKit小鼠脱氢表雄同(DHEA)规格：96T/48T  鹅心肌转录因子GATA6 ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

草毒死（标准品）质量规格：分析标准品 Allidochlor  SYBR绿染法组织端粒酶活性AP电泳分析试剂盒10  人血血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)试剂盒 Human Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA kit

Amberlite® IRP-69阳离子交换树脂质量规格： Amberlite® IRP-69  rabbitInsulin-likegrowthfactor2,IGF-2ELISA试剂盒兔子胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T  人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)ELISA试剂盒 ，英文名： AGA ELISA Kit

氨苯蝶啶（标准品）质量规格：HPLC法含量测定Triamterene  小鼠表皮生长因子(EGF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  RathighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISA试剂盒大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒规格：96T/48T
小鼠内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA检测试剂盒MouseEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 96T/48T  63902-38-5松酯醇二葡萄糖苷品牌  Pinoresinol diglucoside

人聚集蛋白(Agrin)试剂盒 Human Agrin ELISA Kit  113146-74-0酸浆苦味素L规格  Physalin L

Ratadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit大鼠能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒规格：96T/48T  55466-04-1酸枣仁皂苷A厂家  Jujuboside A

载玻片细胞TSH-BETA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  55466-05-2酸枣仁皂苷B说明书  Jujuboside B

Mouse25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISA试剂盒小鼠25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA试剂盒规格：96T/48T  194851-84-8酸枣仁皂苷D品牌  Jujuboside D
F-BL21(DE3)化学感受态细胞38763-29-0甲基黄连碱品牌  Worenine    载玻片细胞PDGF-B蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20

38763-29-0甲基黄连碱厂家  Worenine   载玻片细胞PDGF-A蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20

38748-32-2雷公藤甲素说明书  Triptolide  载玻片细胞PDGF-A蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20

38647-11-9CAS号：38647-11-9厂家  Triptonide   载玻片细胞PARP蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20

38642-49-8苯甲酰芍药苷规格  benzoylpaeoniflorin   载玻片细胞PAR-3蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

更新时间：2024/4/29 9:55:57

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