pEGFP-N1 哺乳动物表达载体

详细内容

GFP-N1编码野生型GFP的一个红移变体，已被优化，有更亮的荧光，在哺乳细胞有更高的表达，(大激发波长=488nm，大释放波长=507nm)。

EGFP基因编码序列，含有超过190个沉默碱基的变化，这符合人类密码子使用偏好。

EGFP序列的一侧已经转变成和KozaK一致的翻译起始位点，进一步提高了在真核细胞的翻译效率。

启动子：CMV

复制子：pUC ori，f1 ori

终止子：SV40 ploy(A)

载体别名：pEGFPN1，pEGFP N1

载体分类：哺乳细胞表达载体，荧光蛋白报告载体

载体大小：4733bp

载体标签：增强型荧光蛋白报告基因EGFP

原核抗性：卡那霉素(Kanamycin)

筛选标记：新霉素(Neomycin)

克隆菌株：DH5α

表达宿主：哺乳细胞

培养条件：37℃，LB培养基

5＇ 测序引物：CMV-F：5＇-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3＇

3＇ 测序引物：EGFP-N：5＇-CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG-3＇

备注：载体的MCS多克隆酶切位点，有EcoR I，BamH I等酶切位点。

储存条件：-20℃
脂酰布洛芬-β-D-葡萄糖苷酸质量规格：美国进口Ibuprofen Acyl-β-D-glucuronide   大鼠角化细胞因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA检测试剂盒Ratkeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 96T/48T  Humangranulocytechemotacticprotein-2,GCP-2ELISA试剂盒人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒规格：96T/48T

外消旋2-羟基布洛芬质量规格：美国进口rac 2-Hydroxy Ibuprofen  人SHC转化蛋白1(SHC1)试剂盒 Human SHC1 ELISA Kit  HumanLactoferrinaibodyIgG,LF/LTFAb-IgGELISAKit人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白抗体IgG(LF/LTFAb-Ig)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1-羟基布洛芬(布洛芬杂质))(非对映)质量规格：美国进口1-Hydroxy Ibuprofen (Ibuprofen Impurity L)(Mixture of Diastereomers)  英文名称MouseVIII-AgELISAKit小鼠凝血因子VIII相关抗原(VIII-Ag)规格：96T/48T  大鼠再生基因蛋白1a(REG-1a)ELISA试剂盒 ，英文名： REG-1a ELISA Kit

1-含氧的布洛芬质量规格：美国进口1-Oxo Ibuprofen  VZV(VARICELLAZOSTER)病毒标准曲线定量PCR扩增检测试剂盒2  人酶(CA)ELISA检测试剂盒Humancarbonicanhydrase,CAELISAKit 96T/48T
犬血管紧张素1-7(Ang1-7)试剂盒 Dog angiotension 1-7,Ang1-7 ELISA kit  502-65-8番茄红素说明书  lycopene

英文名称HumaissuefactorpathwayinhibitorELISAKit人组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA试剂盒规格：96T/48T  81-27-6番泻苷A品牌  Sennoside A

超敏型ECL印迹化学发光溶液A液：100毫升B液：500微升1000cm2  128-57-4番泻苷B规格  Sennoside B

Ratglucocoicoidreceptor-β,GR-βELISA试剂盒大鼠糖皮质激素受体β(GR-β)ELISA试剂盒规格：96T/48T  37271-16-2番泻苷C厂家  Sennoside C

小鼠转录激活因子6(ATF6)ELISA试剂盒 ，英文名： ATF6 ELISA Kit  37271-17-3番泻苷D说明书  Sennoside D
pEGFP-N1 哺乳动物表达载体6537-80-0菊苣酸品牌  Cichoric Acid   组蛋白H3-K18(mono)甲基化检测试剂盒10/20等

65-19-0盐酸育亨宾品牌   Yohimbine   组蛋白H3-K14乙酰化检测试剂盒10/20等

64-86-8秋水仙碱说明书    Colchicine  组蛋白H3-2(mono)甲基化检测试剂盒10/20等

64849-39-4甜叶悬钩子苷说明书  Rubusoside  组蛋白H2B-K5乙酰化检测试剂盒10/20等

64849-39-4甜茶苷说明书  Rubusoside   组蛋白H2B-K46乙酰化检测试剂盒10/20等
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

更新时间：2024/2/6 9:39:09

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