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EPI400来源于EC100菌株,将EC100核基因中控制质粒拷贝数的pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的pcnB基因,即是EPI100菌株。EPI400菌株可以降低质粒的拷贝数,特别适合于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆,在加入诱导剂-CopyCutter Induction Solution后又可以提高质粒产量到正常状态。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
EPI400化学感受态细胞 | EPI400 Chemically Competent Cell | 10×100μl|50×100μl |
保存条件:-80℃
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
紫脲酸铵质量规格:ACSMurexide ELISAKitsEPCR人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体规格:48T/96T 仓鼠白介素6(IL-6)试剂盒 Hamster Ierleukin 6,IL-6 ELISA Kit
盐酸羟胺质量规格:ARHydroxylammonium chloride 小鼠Ⅰ型胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒 ,英文名: PⅠCP ELISA Kit CLIAKitforPTK/CD115(Humanproteiyrosinekinase)ELISAKit人蛋白酪氨酸激酶规格:48T/96T
3,3'-二甲基联萘胺质量规格:>97%,进分3,3'-Dimethylnaphthidine 植物维生素D(VD)ELISA检测试剂盒PlaVitaminD,VDELISAKit 96T/48T 石蜡切片中性脂质苏丹间接染色试剂盒10
丹曲林钠半七水合物质量规格:美国进口Dantrolene, Salt Hemiheptahydrate 人CD10分子(CD10)试剂盒 Human CD10 ELISA Kit ELISAKitGAD-Ab人谷氨酸脱羧酶自身抗体规格:48T/96T
小鼠组织蛋白酶G(CTSG)ELISA试剂盒 ,英文名: CTSG ELISA Kit 19121-58-5澳洲茄碱规格 Solasonine
绵羊主要组织相容性复合体(MHC)ELISA检测试剂盒Sheepmajorhistocompatibilitycomplex,MHCELISAKit 96T/48T 32981-86-510-脱乙酰基巴卡丁III厂家 Deacetylbaccatin III
犬胰岛素样生长因子1(IGF1)试剂盒 Dog insulin-like growth factor 1,IGF1 ELISA kit 27548-93-2巴卡亭Ⅲ说明书 baccatin Ⅲ
英文名称MouseAGRPELISAKit小鼠Agoi相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒规格:96T/48T 26091-79-2白当归脑品牌 Byakangelicol
薄层色谱分析20样本 19573-01-4白当归素规格 Byakangelicin
EPI400化学感受态细胞906-33-2新绿原酸说明书 Neochlorogenic acid 组织二(MDA)比色法定量检测试剂盒50/100
905-99-7隐绿原酸品牌 Cryptochlorogenic acid 组织短链脂酰辅酶A脱氢酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量检测试剂盒20
90332-66-47-木糖基-紫杉醇规格 7-xylosyltaxol 组织短链脂酰辅酶A合成酶(ACYLCOASYHETASE)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20
8-乙氧基滇乌碱品牌 8-O-ethylyunaconitine 组织短链烯脂酰辅酶A水合酶(ENOYLCOAHYDRATASE)活性比色法定量检测试剂盒20
89590-98-7罗汉果苷VI品牌 Mogroside VI 组织丁酰胆碱酯酶活性荧光定量检测试剂盒20
更新时间:2023/11/6 14:18:06
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