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点击次数:1025 发布时间:2022/3/16 9:54:42
BL21(DE3)感受态细胞用于高效表达克隆于含有T7启动子的表达载体(如 pET系列)的基因。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
BL21(DE3)化学感受态细胞 | BL21(DE3)Chemically Competent Cell | 10×100μl|50×100μl |
λDE3区含有T7RNA聚合酶,该区整合于BL21的染色体上,所以称为BL21(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。
BL21(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率达107cfu/μg。
保存条件:-80℃
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
紫檀芪(标准品)Pterostilbene质量规格:HPLC≥98%,标准品 犬游离脂肪酸(FFA)试剂盒 Dog free fatty acids,FFA ELISA kit 人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
紫檀芪,紫檀Pterostilbene质量规格:>99%,BR 英文名称MouseCXCL10ELISAKit小鼠B-细胞趋化因子10(CXCL11)规格:96T/48T 猪食欲素/阿立新B(OX-B)试剂盒 Pig Orexin B,OX-B ELISA Kit
鱼藤酮Rote质量规格:>90%,BR 冰冻切片组织线粒体复合物V蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 HumanEpidermalgrowthfactor,EGFELISAKit 人表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
7-表紫杉醇(标准品)7-Epitaxol质量规格:HPLC≥98%,标准品 RatfactorB,BFELISA试剂盒大鼠B因子(BF)ELISA试剂盒规格:96T/48T HumanMacrophageInflammatoryProtein-3α,MIP-3αELISA试剂盒人巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒规格:96T/48T
英文名称MouseApelin-12ELISAKit小鼠Apelin-12规格:96T/48T 486-86-2N-甲基野靛碱厂家 N-Methylcytisine
波形蛋白(Vimein)结合分子(bindingmolecules)检测试剂盒20 1072-93-1(R、S)表告依春说明书 (R、Sepigoitrin
RatFMS-liketyrosinekinase3ligand,Flt-3LELISA试剂盒大鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)ELISA试剂盒规格:96T/48T 80952-72-3(R型)人参皂苷Rg2品牌 20(R)Ginsenoside Rg2
小鼠组织蛋白酶K(CTSK)ELISA试剂盒 ,英文名: CTSK ELISA Kit (R型)人参皂苷Rg3规格 20(R)Ginsenoside Rg3
绵羊白介素6(IL-6)ELISA检测试剂盒SheepIerleukin6,IL-6ELISAKit 96T/48T R型三七皂苷R2厂家 (R)Notoginsenoside R2
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更新时间:2024/3/14 10:37:57
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