Rosetta(DE3)感受态细胞

详细内容

本产品是采用进口Rosetta菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。Rosetta菌株是携带氯霉素抗性质粒BL21的衍生菌，补充缺乏的6种稀有密码子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA)对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。

使用方法：

1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。

2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。

3、42℃热击45，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。

4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意：

1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
棕榈酸乙酯(standard for GC,≥99%(GC))质量规格：standard for GC,≥99%(GC)Ethyl palmitate  鸡白介素2(IL-2)ELISA检测试剂盒ChickenIerleukin2,IL-2ELISAKit 96T/48T  Humanai-Granulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactoraibody,GM-CSFAbELISA试剂盒人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抗体(GM-CSFAb)ELISA试剂盒规格：96T/48T

异辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))质量规格：Standard for GC,≥99.5%(GC)2-Ethylhexanoic acid  人Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)试剂盒 Human Collagen Type Ⅲ,Col Ⅲ ELISA KIT  Humancalcineurin，CaNELISAKit人钙调1酸酶(CaN)ELISA试剂盒规格：96T/48T

吲达帕胺质量规格：>99%,EP6.0,BRIndapamide  英文名称MousesubstancePreceptorELISAKit小鼠P物质受体(SP-R)规格：96T/48T  人preptin ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

吲达帕胺（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Indapamide  冰冻切片组织HISTONEH3蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20  兔子Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6)试剂盒 Rabbit Krebs yon den Lundgen-6,KL-6 ELISA Kit
小鼠组织蛋白酶Z(CTSZ)ELISA试剂盒 ，英文名： CTSZ ELISA Kit  57420-46-98-O-乙酰山栀苷甲酯说明书  8-O-Acetyl shanzhiside methyl ester

绵羊补体片段3b受体(C3bR)ELISA检测试剂盒SheepComplemefragme3brccptor,C3bRELISAKit 96T/48T  8-乙氧基滇乌碱品牌  8-O-ethylyunaconitine

犬胰岛素原(PI)试剂盒 Canine Proinsulin,PI ELISA Kit  23513-14-66-姜酚规格  6-Gingerol

英文名称Mouseapelin-12ELISAKit小鼠apelin-12(apelin-12)规格：96T/48T  555-66-86-姜烯酚厂家  6-Shogaol

病毒HRP标记制备试剂盒5(100微克/)  23513-15-710-姜酚说明书  10-Gingerol
Rosetta(DE3)感受态细胞97-53-0丁香酚规格  Eugenol   组织碱性1酸酶活性比色法定量检测试剂盒20

97230-47-2品中文苦玄参苷IA说明书  Picfeltarraenin IA   组织甲基化组蛋白H3-K9染色质沉淀分析(CHIP)试剂盒10

970-74-1表没食子儿茶素厂家  EGC   组织脊髓过氧化酶(MPO)活性高质敏感比色法定量检测试剂盒20

96990-18-0地肤子皂苷Ic品牌  Momordin Ic   组织脊髓过氧化酶(MPO)活性比色法定量检测试剂盒20

96574-01-5丹酚酸A品牌  Salvianolic acid A   组织基质金属蛋白酶(MMP-9)捕获检测试剂盒20

更新时间：2024/3/5 9:56:49

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