详细内容
DNATrans是一种高效的阳离子脂质体转染试剂,适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率,并且对细胞毒性低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、高通量DNA转染,基因表达和基因功能研究。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
DNATrans转染试剂 | DNATrans Transfection Reagent | 500μl |
实验准备及重要注意事项
1、DNATrans Transfection Reagent使用应先震荡摇匀。
2、转染效率与细胞密度有很大关系, 不同实验间应保持一个基本的传代步骤,确保转染时细胞没有长满或处于静止期。一般贴壁细胞转染的佳细胞密度是80%-90%,悬浮细胞的佳细胞密度为3-5×105细胞/ml,用于转染的佳细胞度应根据不同的细胞类型或用途而异。
3、转染时不要在培养基中加入抗生素,否则会导致细胞死亡。
储存条件:2~8℃,避光
组胺(>98%,BC)Histamine质量规格:>98%,BC 超氧化物歧化酶(SOD)组织裂解样品制备试剂盒50 HumanVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor3,VEGFR-3ELISAKit 人血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
胰酶(1:4500)Pancreatin质量规格:酶活1:4500,BR RatHeatShockFactor1,HSF1ELISA试剂盒大鼠热休克因子1(HSF1)ELISA试剂盒规格:96T/48T HumanMucin-5subtypeAC,MUC5ACELISA试剂盒人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA试剂盒规格:96T/48T
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君Orphenadrine 质量规格:>98%,BR 小鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员5(TNFRSF5)ELISA试剂盒 ,英文名: TNFRSF5 ELISA Kit 组织游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒20
β-半乳糖苷酶β-Galactosidase质量规格:700u/mg,罗氏分装 犬γ氨基(GABA)ELISA检测试剂盒CanineGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit 96T/48T Humanglucokinase,GCKELISAKit人葡萄糖激酶(GCK)ELISA试剂盒规格:96T/48T
小鼠抗凝血酶受体(A)ELISA检测试剂盒Mouseai-thrombieceptor,AELISAKit 96T/48T 6559-91-74’-去甲基表鬼臼厂家 4’-Demethylepipodophyllotoxin
人抗型肝炎病毒抗体(ai-HCV)试剂盒 Human ai-hepatitis C virus(HCV)aibody ELISA Kit 84272-85-55-O-甲基维斯阿米醇苷说明书 5-O-Methylvisammioside
rabbitTissuefactor,TFELISAKit兔子组织因子(TF)ELISA试剂盒规格:96T/48T 77690-92-76'''-阿魏酰斯皮诺素品牌 6'''Feruloylspinosin
载玻片细胞CYP1A2蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20 90332-66-47-木糖基-紫杉醇规格 7-xylosyltaxol
Humanβcatenin,β-CatELISA试剂盒人β连环蛋白/联蛋白(β-Cat)ELISA试剂盒规格:96T/48T 521-32-47-去甲基银杏双黄酮厂家 Bilobetin
DNATrans转染试剂98243-57-3梭砂贝母碱品牌 Hupehenine 组织结合(酯化)胆酶连续循环荧光定量检测试剂盒20
98243-57-3湖贝甲素规格 Hupehenine 组织结合(酯化)胆酶连续循环比色法定量检测试剂盒20
97747-88-1盐酸川芎嗪规格 Ligustrazine 组织结构型神经元合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性荧光定量检测试剂盒20
97682-44-5伊立替康厂家 Irinotecan 组织结构型内皮细胞合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性荧光定量检测试剂盒20
97-59-6尿囊素说明书 Allantoin 组织胶原蛋白(collagen)比色法定量检测试剂盒20
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/1/2 13:13:59
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