TA克隆试剂盒(含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)

详细内容

本试剂盒采用了拓扑异构酶可以在瞬间（几钟-几分钟）、高效（接近100%）连接DNA片段的原理，这与和传统的T4连接酶原理不同。

试剂盒组份(20次)：

TOPO-Ta Vector(30ng/μl)—————20μl

1000bp Control（30ng/μl）————5μl

10×Enhancer———————————20μl

产品特点：

1.可以在瞬间（几钟-几分钟）完成连接。

2.无需冰浴和热休克，室温5分钟内完成转化；无需1小时复苏，只需37℃10分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板只需15-20分钟。

3.无自连、零背景，无需繁琐蓝白斑筛选，见到长出的克隆便是有插入的（接近100%）。

4.可以连接长达10kb片段（即使连接5kb片段，挑10个菌落，至少8个是有插入的），是目上简单、快速、零背景免筛选的TOPO TA克隆载体。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

本制品别名：TA载体连接试剂盒
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
组胺二盐酸-α,α,β,β-d4质量规格：美国进口Histamine-α,α,β,β-d4 Di  人骨碱性1酸酶(BALP)ELISA检测试剂盒Humanbonealkalinephosphatase,BALPELISAKit 96T/48T  石蜡切片神经纤维银染试剂盒50

R(-)-α-甲基组胺二盐酸质量规格：美国进口R(-)-α-Methylhistamine Di  大鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)试剂盒 Rat ierferon-inducible protein 10,IP-10 ELISA Kit  ELISAKitNMP-22人核基质蛋白22规格：48T/96T

酸卡巴拉汀- 标记d4质量规格：美国进口Rivastigmine Tartrate - Labeled d4  CLIAKitforVB6(MouseVitaminB6)ELISAKit小鼠维生素B6规格：48T/96T  大鼠胃动素受体(MTLR)ELISA试剂盒 ，英文名： MTLR ELISA Kit

根皮苷（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Phlorizin  明胶法大鼠胚胎干细胞繁殖试剂盒10  人抗乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)ELISA检测试剂盒Humanai-hepatitisBviruscoreaibody,HBcAbELISAKit 96T/48T
rabbitthyroxine,T4ELISAKit兔子甲状腺素(T4)ELISA试剂盒规格：96T/48T  14937-32-71,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖品牌  1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose

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小鼠组织蛋白去乙酰化酶2(Hdac2/Yy1bp)ELISA试剂盒 ，英文名： Hdac2/Yy1bp ELISA Kit  30964-13-71,5-二咖啡酰奎宁酸说明书  1,5-Dicaffeoylquinic acid

小鼠凝血酶受体()ELISA检测试剂盒Mousethrombieceptor,ELISAKit 96T/48T  86632-03-33,4,5-三咖啡酰奎宁酸品牌  3,4,5-Tricaffeoylquinic acid
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白花胡丁素厂家  Praeruptorin D   组织络氨酸1酸酶(TP)活性荧光定量检测试剂盒20

白花胡丙素规格 （+）-Praeruptorin C   组织络氨酸1酸酶(TP)活性比色法定量检测试剂盒20

α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷说明书 α-spinasteryl-3-O-β-D-glucoside   组织硫酸酶(rhodanase)活性比色法定量检测试剂盒20

更新时间：2023/11/6 14:18:06

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