平末端载体连接试剂盒（含多克隆位点）(T4连接酶技术)

详细内容

本试剂盒是一种的自杀基因阳性选择克隆系统，可以高效克隆平末端PCR产物和任何具有平末端的DNA片段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的 DNA片段都有效。 阳性选择载体和插入片段连接仅需5分钟即可获得超过95%的阳性重组克隆。由具有校正活性的聚合酶（如：Pfu polymerase）扩增的平末端 PCR 产物可直接连入克隆载体。连接产物可直接转化常用的菌株。

试剂盒提供一个新颖的自杀基因阳性选择克隆载体t。该载体含有致死的自杀基因（内含多克隆位点），当载体与片段连接成功，自杀基因无法正确表达，包含重组子的细胞可以正常生长；当载体与片段连接不成功，载体自连后自杀基因正确表达，包含自连空载体的细胞无法存活，即“零ZERO”背景。这种阳性筛选策略无需蓝白斑筛选，大地加速了克隆筛选进程。

储存条件：-20℃，有效期6个月。

本制品别名：平末端克隆试剂盒
左西孟坦Levosimendan质量规格：美国进口 大鼠糖原1酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA检测试剂盒RatGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit 96T/48T  Humanamyloidbetapeptide1-42,Aβ1-42ELISA试剂盒96T人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA试剂盒规格：96T/48T

利奈唑酮-d3Linezolid-d3质量规格：美国进口 人补体片段4d(C4d)试剂盒 Human Compleme Fragme 4d,C4d ELISA Kit  HumanArginase,ArgELISAKit人精氨酸酶(Arg)ELISA试剂盒规格：96T/48T

13X分子筛(60-80目,气相、液相色谱柱)Molecular sieves Type 13X质量规格：60-80目,气相、液相色谱柱  Rattissueinhibitorsofmetalloproteinase2,TIMP-2ELISAKit大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T  人β内啡肽(β-EP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

13X分子筛(80-100目,气相、液相色谱柱)Molecular sieves Type 13X质量规格：80-100目,气相、液相色谱柱  M.scrofulaceumRFLP基因分析试剂盒20  兔子(T)试剂盒 Rabbit Testosterone,T ELISA Kit
鸭病毒性肠炎病毒(DEV)ELISA检测试剂盒Duckviruseeritis,DEVELISAKit 96T/48T  98665-22-6灵芝酸G品牌  Ganoderic acid G 

犬乙酰胆碱受体抗体(AChRab)试剂盒 Canine acetylcholine receptor aibody,AChRab ELISA Kit  98296-48-1灵芝酸C2规格  Ganoderic acid C2 

英文名称MouseAβ1-42proteinELISAKit小鼠Aβ1-42蛋白规格：96T/48T  108340-60-9灵芝酸D厂家  Ganoderic acid D  

冰冻组织固着液50毫升  74285-86-2雷酚内酯说明书  Triphenolide 

Ratferritin,FEELISA试剂盒大鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒规格：96T/48T  74285-86-2雷酚内酯品牌  Triphenolide
平末端载体连接试剂盒（含多克隆位点）(T4连接酶技术)林泽兰内酯B规格  Eupalinilide B   组织牛病毒性腹泻病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定性试剂盒20

苦玄参苷ⅠB说明书  Piefeltarraenin ⅠB   组织牛病毒性腹泻病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定量PCR扩增检测试剂盒20

金色酰胺醇酯厂家  Aurantiamide acetate   组织凝血酶/活化凝血因子II(THROMBIN/FACTORIIa)活性荧光定量检测试剂盒20

绞股蓝皂苷XLIX规格  Gypenoside XLIX   组织凝血酶/活化凝血因子II(THROMBIN/FACTORIIa)活性比色法定量检测试剂盒20

甲基麦冬黄酮B说明书  Methylophiopogo B    组织柠檬酸合成酶活性比色法定量检测试剂盒20
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

更新时间：2023/11/6 14:18:06

快速询价

留言框
感兴趣的产品：	*
您的单位：	*
您的姓名：	*
联系电话：	*
详细地址：
常用邮箱：
您的任何要求、意见或建议： *
验证码：	*