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点击次数:1016 发布时间:2022/3/16 9:48:33
本试剂盒T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的用载体。这种载体是由pBlueScript II SK(+)质粒改建而成,和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同,T Simple载体通过改造pBlueScript II SK(+),在原pBlueScript II SK(+)多克隆位点引入 Xcm I酶切后使其原多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基,因此有更高的重组效率。同时它消除了pBlueScript II SK(+)载体上的多克隆酶切位点,
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
T Simple 载体连接试剂盒(不含多克隆位点) | T Simple vector ligation Kit | 20次|60次 |
试剂盒组份:
T Simple Vector(30ng/μl)———————20μl
1000bp Control(30ng/μl)-——————5μl
10×PEG Enhancer-———————————50μl
10×Ligation Buffer-—————————40μl
2×Quick Ligation Buffer-———————100μl
T4 DNA ligase(5Uμl)—————————20μl
储存条件:-20℃。
本制品别名:T载体克隆试剂盒
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
左旋多巴质量规格:HPLC>97%,BRL-dopa 人蛋白S(ProteinS)ELISA检测试剂盒HumanProteinSELISAKit 96T/48T Humanai-cytomegalovirusIgGaibody,ai-CMVIgGELISA试剂盒人抗巨细胞病毒抗体IgG(ai-CMVIgG)ELISA试剂盒规格:96T/48T
L-a-氨基己二酸质量规格:>98%,BRL-a-Aminoadipic acid 大鼠维受体应答蛋白2(RARRES2)试剂盒 Rat Retinoic acid receptor responder protein 2,RARRES2 ELISA kit HumanBoneMorphogeneticProtein6,BMP-6ELISAKit人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒规格:96T/48T
L-环丙基丙氨酸质量规格:>98%,BRL-Cyclopropylalanine 英文名称RatVitaminB6ELISAKit大鼠维生素B6(VB6)规格:96T/48T 人T细胞受体(TCR)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
L-高苯丙氨酸质量规格:>98%,BRL-Homophenylalanine 烘赔食品乙酸激酶法定量检测试剂盒20 兔子α2巨球蛋白(A2M)试剂盒 Rabbit alpha-2-macroglobulin,A2M ELISA kit
冰冻切片组织组蛋白H3-K9甲基化荧光显微镜检测试剂盒10/20 大花双参苷A规格 Triplostoside A
RatFattyacyl-CoAsyhetase,ACSELISA试剂盒大鼠脂酰辅酶A合成酶(ACS)ELISA试剂盒规格:96T/48T 31524-62-6异补骨脂二氢黄酮厂家 Isobavachin
小鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒 ,英文名: t-PA ELISA Kit 41060-15-5新补骨脂异黄酮说明书 Neobavaisoflavone
小鼠1酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA检测试剂盒MousePhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit 96T/48T 18609-17-1白麻苷品牌 Quercetin-3-O-sophoroside
人抗促卵泡素抗体(Ai FSH Ab)试剂盒 Human Ai FSH Ab ELISA Kit 二氢青蒿酸规格 Dihydroartemisinic acid
T Simple 载体连接试剂盒(不含多克隆位点)木蝴蝶苷A品牌 Oroxin A 组织人类巨细胞病毒蛋白酶(HCMVPROTEASE)活性荧光淬灭法定量检测试剂盒20
木蝴蝶苷A规格 Oroxin A; Baicalin-7-glucoside 组织染色质沉淀分析(CHIP)完全试剂盒(包括抗体)10
美迪紫檀素说明书 Medicarpin 组织染色质沉淀分析(CHIP)试剂盒10
毛萼结晶甲说明书 Maoecrystal A 组织切割酶/β分泌酶(MENAPSIN2;β-SECRETASE)活性荧光淬灭法定量检测试剂盒20
毛冬青皂苷甲厂家 Ilexsaponin A1 组织羟赖氨酸(HYL)含量比色法定量检测试剂盒20
更新时间:2024/2/7 9:26:48
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