pRT20-T载体克隆试剂盒

详细内容

pRT20-T 载体是一种高效克隆PCR产物(TA Clonging)的用载体。它是由pUC19载体改造成的(pRT20-T载体在pUC19质粒MCS位点附近插入T7启动子序列)，MCS位点经过EcoR V酶切后在两侧的3’端添加”T”制备而成。因大部分Taq酶会在PCR产物的3’末端添加一个“A”，所以用本载体可以高效地进行PCR产物克隆。

本载体在pUC19载体的基础上对LacZ基因的编码序列进行了改造，加强了重组菌落在X-gal/IPTG/Amp/LB琼脂平板上的颜色筛选，具有更明显的蓝色菌落颜色，大大降低了假阳性率。由于在MCS位点附近插入了T7启动子序列，因此可以对插入DNA片段直接进行体外转录实验。

本载体在插入位点两侧各有一个BamH I位点，可以用BamH I直接酶切检测重组子，简化了检测程序。按照标准连接体系计算(10μl体系用1μl载体)，本载体可至少使用20次。包装内含有了2×ligation solution，是混合有T4 连接酶，连接buffer以及连接增强剂的MasterMix，使用方便，且能显著提高连接效率。另外，包装内提供M13引物，可以方便用菌落或菌液PCR快速检测阳性克隆。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。
羟基豨莶精醇 HPLC≥98% 5mg 小鼠酰NA合成酶复合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)ELISA试剂盒 ，英文名： AIMP1 ELISA Kit

氧代beta谷甾醇 HPLC≥98% 5mg 人胸腺表达趋化因子(TECK/CCL25)ELISA检测试剂盒Humahymusexpressedchemokine,TECKELISAKit 96T/48T

氧代扁柏脂素 HPLC≥98% 5mg 大鼠角化细胞生长因子(KGF)试剂盒 Rat Keratinocyte Growth Factor,KGF ELISA Kit

乙酸,二羟基双氢黄酮酯 HPLC≥98% 5mg 英文名称RatSubstancePELISAKit大鼠P物质(SP)规格：96T/48T

异戊烯氧基gamma花椒碱 HPLC≥98% 5mg 咖啡糖精(saccharin)含量紫外光谱法定量检测试剂盒20

(),异海松二烯,二醇 HPLC≥98% 5mg ELISAKitHyp人羟脯氨酸规格：48T/96T

羟基荜澄茄烯酮 HPLC≥98% 5mg 小鼠纤维连接蛋白(FN)ELISA试剂盒 ，英文名： FN ELISA Kit

Alfa铁杉脂素 HPLC≥98% 5mg 牛乙酰乙酸检测(ACAC)ELISA检测试剂盒BovineAcetoaceticacid,ACACELISAKit 96T/48T

Alpha菠菜甾酮 HPLC≥98% 5mg 人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)试剂盒 Human 8-Hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG ELISA kit

alpha乳香酸 HPLC≥98% 5mg 英文名称MouseIerleukin-17，IL-17ELISAKIT小鼠白介素-17(IL-17)规格：96T/48T
人Preptin蛋白(Preptin)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:Preptin Human Preptin ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组Preptin浓度
pRT20-T载体克隆试剂盒人成纤维细胞生长因子7(FGF7/KGF)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:FGF-7, KGF, HBGF-7 Human FGF7/KGF(Fibroblast Growth Factor 7) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组FGF7/KGF浓度
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

更新时间：2024/3/29 10:13:07

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