T4连接酶

详细内容

本T4 DNA Ligase是从表达T4 DNA Ligase 基因的经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。

产品组分：

T4 DNA ligase (5U/μl)————————100 U (20μl)

10×T4 DNA Ligation Buffer——————0.2 ml

50%PEG Solution————————————0.15 ml

活性定义：此酶的活力单位为Weiss Unit。1个Weiss Unit相当于约200个粘性末端连接单位(cohesive-end ligation unit, CEU)。1个CEU单位定义为在20μl的连接反应体系中，在16℃30分钟内，能使50%的经HindIII消化的λDNA片段连接所需的酶量。

注意事项：

1、T4 DNA Ligase的终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。

2、PEG可以大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。

3、为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。

4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。

储存条件：-20℃。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
,,,四甲氧基 HPLC≥98% 5mg 蛋白样品树脂法去内试剂盒20

,二甲氧基 HPLC≥98% 5mg RatMyoglobin,MYO/MBELISA试剂盒大鼠肌红蛋白(MYO/MB)ELISA试剂盒规格：96T/48T

,二乙酰氧基黄酮 HPLC≥98% 5mg 小鼠线粒体乙脱氢酶(ALDM)ELISA试剂盒 ，英文名： ALDM ELISA Kit

ObetaD吡喃葡萄糖苷芹菜甙元 HPLC≥98% 5mg 兔细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA检测试剂盒Rabbitlymphocytefunctionassociatedaigen3,LFA-3ELISAKit 96T/48T

二十三基,苯二醇 HPLC≥98% 5mg 牛诱导型合成酶(iNOS)试剂盒 Bovine Inducible Niic Oxide Syhase,iNOS ELISA Kit

羟基,二甲氧基黄酮 HPLC≥98% 5mg 英文名称HumanEndostatinELISAKit人内皮抑素(Endostatin)ELISA试剂盒规格：96T/48T

羟基甲氧基铁屎米酮 HPLC≥98% 5mg 蛋白样品液相法去内试剂盒20

羟基乙酰氧基甲氧基黄酮 HPLC≥98% 5mg RatMyosin,MYSELISA试剂盒大鼠肌球蛋白(MYS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

羟基乙酰氧基黄酮 HPLC≥98% 5mg 小鼠线粒体解偶联蛋白1(UCP1)ELISA试剂盒 ，英文名： UCP1 ELISA Kit

乙酰氧基羟基黄酮 HPLC≥98% 5mg 兔子主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISA检测试剂盒RabbitmajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/RLAⅢELISAKit 96T/48T
人可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员12A(sTNFRSF12A)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:CD266, FN14, TWEAKR, tumor necrosis factor receptor superfamily member 12A, TNF receptor superfamily member 12A Human sTNFRSF12A(Soluble Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 12A) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组sTNFRSF12A浓度
T4连接酶人补体因子H相关蛋白1(CFHR1)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:CFHL, CFHL1, CFHL1P, CFHR1P, FHR1, H36-1, H36-2, HFL1, HFL2 Human CFHR1(Complement Factor H Related Protein 1) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组CFHR1浓度

更新时间：2024/3/29 10:13:07

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