多片段一步法(快速/无缝)克隆试剂盒

详细内容

本产品是一款简单、快速、高效的多片段DNA定向克隆产品，该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。将载体在克隆位点进行线性化，并在插入片段PCR引物5’端引入线性化克隆载体末端序列，使得插入片段PCR产物5’和3’末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列 (15 bp～20 bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合，在重组酶Exnase的催化下，仅需反应30 min即可进行转化，完成定向克隆。克隆阳性率可达95%以上。克隆载体酶切产物或PCR

试剂盒中包含有针对多片段重组反应而优化的反应缓冲液和重组酶Exnase。使用该试剂盒，可以一次实现多至5个片段的顺序拼接克隆。Exnase还兼容常规酶切、PCR反应体系。

该试剂盒可用于多片段拼接克隆、全基因合成和DNA定点突变。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
银线草醇 D HPLC≥98% 5mg 载玻片细胞BCL2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20

印度黄酮，优咕吨酮  HPLC≥98% 5mg MouseHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISAKit小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

印楝素 HPLC≥98% 5mg 小鼠心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒 ，英文名： CT-1 ELISA Kit

英西卡林 HPLC≥98% 5mg 小鼠肝脂酶(HL)ELISA检测试剂盒Mousehepaticlipase,HLELISAKit 96T/48T

樱花亭 HPLC≥98% 5mg 人花生四烯酸5脂氧合酶(ALOX5/LOG5)试剂盒 Human Arachidonate 5-lipoxygenase,ALOX5/LOG5 ELISA kit

樱黄素 HPLC≥98% 5mg RatC-PeptideELISAKit大鼠C肽(C-Peptide)ELISA试剂盒规格：96T/48T

樱桃甙；洋李甙 HPLC≥98% 5mg 20%Formalin固着液50毫升

幼枝含断氧化马钱子甙 HPLC≥98% 10mg MouseCXC-chemokineligand16,CXCL16ELISA试剂盒小鼠CXC趋化因子配体16(CXCL16)ELISA试剂盒规格：96T/48T

羽扇豆鹼 HPLC≥98% 5mg 小鼠心肌营养素1(CT1)ELISA试剂盒 ，英文名： CT1 ELISA Kit

羽扇豆异黄酮 HPLC≥98% 5mg 兔子组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA检测试剂盒rabbitTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISAKit 96T/48T
人白介素18(IL-18)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:IL18, IGIF, IL-1g, IL-1F4, Interferon-gamma-inducing factor Human IL-18(Interleukin 18) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组IL-18浓度
多片段一步法(快速/无缝)克隆试剂盒人类肝素酶(HPA)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:HPSE, HPR1, HPSE1, HSE1 Human HPA(Heparanase) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组HPA浓度

更新时间：2024/4/1 11:22:47

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