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点击次数:1021 发布时间:2022/3/16 9:06:26
本试剂盒是利用拓扑异构酶(Topoisomerase)高效快速连接DNA片段的原理进一步研发而成,与传统的T4连接酶相比,具有以下优势:
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒 | Zero TOPO-Blunt Cloning Kit | 20T |
1)快速,仅需1-5分钟即可完成连接反应。
2)高效,无自连现象,阳性克隆率接近100%,无需设置蓝白斑筛选;
3)操作简单,从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。
4)可连接长达10kb目的产物。
产品用途:平末端PCR产物的快速克隆。克隆后PCR产物的快速测序【使用M13F/M13R引物】。
产品组份:
pESI-Blunt vector 30ng/µl)————20µl
1kb control insert(40ng/µl)————5µl
10×Enhancer————————20µl
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期12个月。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
乙基betaD吡喃葡萄糖苷 HPLC≥98% 5mg 蛋白巯基化(S-thiolation)高效液相色谱(HPLC)分析试剂盒20
乙酸(肉)桂酯 HPLC≥98% 5mg Ratmonocytechemotacticprotein2,MCP-2ELISA试剂盒大鼠单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA试剂盒规格:96T/48T
乙酸Delta香树精酯 HPLC≥98% 5mg 小鼠锌结合α2-糖蛋白1(αZGP1)ELISA试剂盒 ,英文名: αZGP1 ELISA Kit
乙酸茶酸酯 HPLC≥98% 5mg 兔子转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA检测试剂盒rabbitansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAKit 96T/48T
乙酸东莨菪素酯 HPLC≥98% 5mg 牛转化生长因子β2(TGFβ2)试剂盒 Bovine ansforming growth factors β2,TGFβ2 ELISA Kit
乙酸二聚松柏酯 HPLC≥98% 5mg 英文名称HumanFIIELISAKit人凝血因子II(FII)ELISAKit规格:96T/48T
乙酸六棱菊亭酯 HPLC≥98% 5mg 蛋白巯基化(S-thiolation)同位素法分析试剂盒20
乙酸维生素E HPLC≥98% 20mg Ratmonocytechemotacticprotein3,MCP-3ELISA试剂盒大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒规格:96T/48T
乙酰胺 HPLC≥98% 5mg 小鼠心营养素样细胞因子1(CLCF1)ELISA试剂盒 ,英文名: CLCF1 ELISA Kit
乙酰基异柏烯酸 HPLC≥98% 5mg 兔子组胺(HIS)ELISA检测试剂盒rabbitHistamine,HISELISAKit 96T/48T
人氨基端脑钠素(NT-proBNP)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:E-EL-M0918 Human NT-proBNP(N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组NT-proBNP浓度
零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒人膜联蛋白A2(ANXA2)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:Annexin II, ANX2, ANX2L4, CAL1H, LIP2, LPC2, LPC2D, P36, PAP-IV Human ANXA2(Annexin A2) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组ANXA2浓度
更新时间:2024/3/12 9:23:59
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