pBalbGST-Tev质粒

详细内容

本质粒以XhoI线性化方式提供，请配合BalbRec PCR产物一步无缝克隆试剂盒使用（CatNo. JN0001）。

  GST是实验室中常用的融合标签，能够促进目标蛋白质的溶解性和正确折叠。Thormbin作为常用的切除GST标签的蛋白酶，常常出现在目标蛋白中，从而限制了其应用。pBalbGST-Tev质粒在 Thombin位点后引入了TEV Protease切点，大的增加了标签切除的特异性。

  目的基因扩增按常规方法设计引物后，在5′端引物添加以下序列：CTC TAC TTC CAA GGT； 3′端引物添加：GTC ACG ATG CGG CCG。3′端引物需要加入终止密码子。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
罗旦梅交酯 HPLC≥98% 5mg 人活化蛋白C(APC)试剂盒 Human activated protein C,APC ELISA Kit

罗汉松黄酮 A. HPLC≥98% 5mg RatCompleme3,C3ELISAKit大鼠补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒规格：96T/48T

洛柯碱 HPLC≥98% 5mg 15%聚烯酰胺尿素(7M)凝胶500毫升

骆驼蓬碱 HPLC≥98% 5mg MousecrosslinkedN-telopeptideoftypeⅠcollagen,XELISA试剂盒小鼠Ⅰ型胶原N末端肽(X)ELISA试剂盒规格：96T/48T

落叶松树脂醇 HPLC≥98% 5mg 小鼠血管活性肠肽(VIP)ELISA试剂盒 ，英文名： VIP ELISA Kit

马兜铃内酰胺 FI HPLC≥98% 5mg 小鼠破骨细胞分化因子(ODF)ELISA检测试剂盒Mouseosteoclastdiffereiationfactor,ODFELISAKit 96T/48T

马桑宁内酯 HPLC≥98% 5mg 人混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)试剂盒 human mixed lineage kinase domain-like,MLKL ELISA Kit

马桑亭 HPLC≥98% 5mg RatCompleme4,C4ELISAKit大鼠补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒规格：96T/48T

马尾杉醇 C HPLC≥98% 5mg 1毫摩尔甲萘醌(Menadione)溶液10毫升

甾,,(),四烯酮 HPLC≥98% 5mg MouseCrosslaps,CrELISA试剂盒小鼠骨胶原交联(Cr)ELISA试剂盒规格：96T/48T
人血管内皮生长因子B(VEGF-B)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:VEGFB, VEGFL, VRF Human VEGF-B(Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组VEGF-B浓度
pBalbGST-Tev质粒人丙酮酸激酶M2型同工酶(PKM2)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:PKM, CTHBP, HEL-S-30, OIP3, PK3, PKM2, TCB, THBP1, pyruvate kinase M1/2,Tumor M2-PK,p58 Human PKM2(Pyruvate Kinase, Muscle) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组PKM2浓度

更新时间：2024/2/26 10:19:42

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