详细内容
pBalbAvi-C为目标蛋白C端融合Avi Tag设计,是预先用Nde I线性化的载体,可配合BalbRec PCR产物一步无缝克隆试剂盒(CatNo.JN0001)使用,用于在中快速高效表达和蛋白质Biotin标记。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
pBalbAvi质粒 |
| 20次(1μg) |
为保证标记效率,请选择高表达biotin化酶的宿主菌BalbBiotin BL21(CatNo.PJN0020),也可以用其他兼容的宿主菌表达并纯化完成后用百奥莱博Biotinylation Kit(CatNo.PJN0020)进行体外Biotin标记。
目的基因扩增按常规方法设计引物后,在5′端引物添加以下序列:GAA GGA GAT ATA CAT; 3′端引物添加:GAT GTC GTT CAG GCC。注意:5′端引物从个氨基酸开始(ATG), 3′端引物不要包含终止密码子。
邻苯二甲酸二甲酯 HPLC≥98% 5mg 蛋白电泳尼罗红染色试剂盒20
邻苯二甲酸二辛酯 GC≥98% 20mg Ratmaixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISA试剂盒大鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
灵芝醇 B HPLC≥98% 5mg 小鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
灵芝醇A HPLC≥98% 5mg Rat stem cell factor / mast cell growth factor (SCF/MGF) ELISA Kit 大鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒
灵芝醇F HPLC≥98% 5mg Humanheparansulfate,HSELISAKit 人硫酸类肝素(HS)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
灵芝马酮 HPLC≥98% 5mg Cheraxquadricarinatuslipovitellin/vitellin,Lv/VnELISA试剂盒红螯光壳螯虾卵黄脂0蛋白/卵黄0蛋白(Lv/Vn)ELISA试剂盒规格:96T/48T
榴花碱 HPLC≥98% 5mg 原生质酵母细胞转化试剂盒20
柳匍匐苷 HPLC≥98% 5mg MouseIgMELISAKit小鼠IgMELISA试剂盒规格:96T/48T
柳杉二醇 HPLC≥98% 5mg 小鼠血管紧张素1-7(Ang1-7)ELISA试剂盒 ,英文名: Ang1-7 ELISA Kit
六氢姜黄素 HPLC≥98% 5mg 小鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISA检测试剂盒MouseToll-likereceptor9,TLR-9ELISAkit 96T/48T
人低密度脂蛋白受体(LDLR)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:FH, FHC, LDLCQ2, Familial Hypercholesterolemia Human LDLR(Low Density Lipoprotein Receptor) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组LDLR浓度
pBalbAvi质粒人足盂蛋白(PCX)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:GCTM-2 antigen, Gp200, Podocalyxin-like protein 1, PC, PCLP-1, PODXL, PCLP, PCLP1 Human PCX(Podocalyxin) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分重组PCX浓度。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/3/7 10:09:57
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