pGL6-TA报告基因质粒

详细内容

pGL6-TA报告基因质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到低。

pGL6-TA质粒主要用于在其多克隆位点插入特定的启动子、增强子等调控元件研究该调控序列的基因转录调控活性。pGL6-TA和pGL6相比在多克隆位点和luc基因之间加入了一段minimal TA promoter，使luc基因的基础转录水平提高。

使用说明：

次使用时请先取少量本质粒转化，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。

用于插入调控序列：在多克隆位点选取适当的酶切位点，经酶切处理后连入适当的基因转录调控序列。pGL6-TA也可以用作报告基因检测时的阴性对照。

pGL6-TA质粒以及以此质粒为模板构建的质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒
盐酸阿米替林  HPLC≥98% 100mg 10倍PIPES浓缩缓冲溶液100毫升

去甲替林盐酸盐 HPLC≥98% 20mg MouseChorionicGonadoophin,CGELISA试剂盒小鼠绒毛膜促性腺激素(CG)ELISA试剂盒规格：96T/48T

苯佐卡因  HPLC≥99% 100mg 小鼠血管性血友病因子(vWF)ELISA试剂盒 ，英文名： vWF ELISA Kit

飞燕草色素 HPLC≥98% 10mg 兔子内皮抑素(ES)ELISA检测试剂盒rabbitEndostatin,ESELISAKit 96T/48T

矮牵牛色素   HPLC≥98% 5mg 犬α-3干扰素(IFN-α3)试剂盒 Canine Ierferon alpha-3,IFN-α3 ELISA kit

芍药素  HPLC≥98% 10mg 英文名称HumanEpinephrineELISAKit人(Epinephrine)规格：96T/48T

锦葵色素  HPLC≥98% 10mg 单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20

环腺苷 HPLC≥98% 20mg RatMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISA试剂盒大鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

安息香 HPLC≥99% 100mg 小鼠血管细胞粘附分子1(VCAM1)ELISA试剂盒 ，英文名： VCAM1 ELISA Kit

D绵子糖 HPLC≥98% 20mg 兔子脑素/脑尿肽(BNP)ELISA检测试剂盒rabbitbrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit 96T/48T
人Ⅰ型胶原氨基端原肽(PⅠNP)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:P1NP, PINP, N-Propeptide Of Type I Procollagen, Procollagen I Amino Terminal Propeptide Human PⅠNP(Procollagen Ⅰ N-Terminal Propeptide) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组PⅠNP浓度
pGL6-TA报告基因质粒人FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:FLT3LG, Flt3-L, FL, Fms-Related Tyrosine Kinase 3 ligand Human Flt3L(FMS-like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组Flt3L浓度
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

更新时间：2023/12/26 9:24:22

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