详细内容
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和HA tag(HA标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码HA标签的序列,因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
N端HA标签融合蛋白质粒 | N-HA plasmid(with CMV promoter) | 1μg |
使用说明:
1. 次使用时请先取少量本质粒转化,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件:-20℃。
Hederacolchiside A HPLC≥98% 5mg 小鼠血小板衍生生长因子A(PDGFA)ELISA试剂盒 ,英文名: PDGFA ELISA Kit
Hederacolchiside E HPLC≥98% 5mg 兔子基质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA检测试剂盒rabbitmaixmetalloproteinase4,MMP-4ELISAKit 96T/48T
hederagenin OαLrhamnopyranosyl(→)(βDglucopyranosyl(→))αLarabinopyranoside HPLC≥98% 5mg 犬白介素4(IL-4)试剂盒 Dog ierleukin 4,IL-4 ELISA Kit
Karenitecin HPLC≥98% 20mg 英文名称HumanAquaporin5ELISAKit人水通道蛋白5(AQP5)规格:96T/48T
L羟基异亮氨酸 HPLC≥98% 20mg 大鼠PDGFβ基因甲基化检测试剂盒20
Larotaxel HPLC≥98% 20mg RatleukoieneE4,LT-E4ELISA试剂盒大鼠白三烯E4(LTE4)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Lup()enoic acid, [βDglucopyranosyl(→)[aLrhamnopyranosyl) (→)a Larabinopyranosyl]oxy], (β,a)) HPLC≥98% 5mg 小鼠血小板生长因子(PDGF)ELISA试剂盒 ,英文名: PDGF ELISA Kit
小鼠内脂素/内脏脂肪素(visfatin)ELISA检测试剂盒MousevisfatinELISAKit 96T/48T
L半胱氨酸 HPLC≥98% 200mg 人基质细胞衍生因子1a(SDF1A)试剂盒 Human somal cell-derived factor 1 alpha,SDF1A ELISA kit
L苯丙氨酸 HPLC≥98% 200mg RatCalretinin,CRELISAKit大鼠钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒规格:96T/48T
人凝血酶原(PT)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:Prothrombin,coagulation factor II, F2, PT, RPRGL2, THPH1 Human PT(Prothrombin) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组PT浓度
N端HA标签融合蛋白质粒人磷脂酶A2受体1(PLA2R1)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:PLA2R1, CLEC13C, PLA2-R, PLA2G1R, PLA2IR, PLA2R, phospholipase A2 receptor 1 Human PLA2R1(Phospholipase A2 Receptor 1) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组PLA2R1浓度
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2023/12/8 10:35:28
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