详细内容
本质粒用于在哺乳动物细胞中表达N端和Myc tag (Myc标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码Myc标签的序列,因此可以表达出含有Myc标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
N端Myc标签融合蛋白质粒 | N-Myc plasmid(with CMV promoter) | 1μg|100μg |
保存:-20℃
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
D(十)无水葡萄糖 HPLC≥98% 100mg 10%Formalin固着液50毫升
DA HPLC≥98% 20mg MouseBrainderivedneuroophicfacor,BDNFELISA试剂盒小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Dapagliflozin HPLC≥98% 20mg 小鼠血小板衍生生长因子B(PDGFB)ELISA试剂盒 ,英文名: PDGFB ELISA Kit
DHApaclitaxel HPLC≥98% 20mg 兔子基质金属蛋白酶5(MMP-5)ELISA检测试剂盒rabbitmaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit 96T/48T
DL薄荷醇 GC≥98% 20mg 犬白介素6(IL-6)试剂盒 Dog Ierleukin 6,IL-6 ELISA Kit
DL蛋氨酸(甲硫氨酸) HPLC≥98% 200mg 英文名称HumanFibroblastgrowthfactoracidicELISAKit人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)规格:96T/48T
DL丁香树脂酚 HPLC≥98% 5mg 大鼠p16基因甲基化检测试剂盒20
DL精氨酸 HPLC≥98% 200mg RatLeukoieneC4,LT-C4ELISA试剂盒大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒规格:96T/48T
DRF HPLC≥98% 20mg 小鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒 ,英文名: PDGF-AB ELISA Kit
D阿拉伯糖 HPLC≥99% 100mg 小鼠膀胱抗原(BTA)ELISA检测试剂盒MouseBladdeumoraigen,BTAELISAKit 96T/48T
人卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:FRP, FSL1 Human FSTL1(Follistatin Like Protein 1) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组FSTL1浓度
N端Myc标签融合蛋白质粒人凝血因子Ⅹ(F10)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:Factor X,eponym Stuart-Prower factor,prothrombinase,F10, FX, FXA Human F10(Coagulation Factor Ⅹ) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组F10浓度
更新时间:2023/12/8 10:34:31
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