即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS)

详细内容

本产品是用Xcm I酶切环状的可保种型蓝白T载体(BTN60803)去掉一段1.3Kb的插入片段后得到的线性DNA片段(载体部分)，其两个末端的5′都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：

1. 由于是通过Xcm I酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。

2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。

3. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。

4. 克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。

5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。

6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。

7.含有丝状f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
羟基癸烯酸 HPLC≥98% 20mg 小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)ELISA试剂盒 ，英文名： GSSG ELISA Kit

羟基攀援山橙碱 HPLC≥98% 20mg 小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA检测试剂盒MouseCaspase-9,Casp-9ELISAKit 96T/48T

羟基喜树碱 HPLC≥98% 20mg 人脊髓灰质炎病毒(PV)抗体(IgG)试剂盒 Human Poliomyelitis Virus(PV) aibody IgG ELISA Kit

去乙酰紫杉醇;表去乙酰基紫杉醇 HPLC≥98% 20mg RatBonemorphogeneticprotein6,BMP-6ELISAKit大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒规格：96T/48T

脱乙酰巴卡亭 HPLC≥98% 20mg 0.5摩尔EDTA分子生物溶液500毫升

O罗汉果苷V HPLC≥98% 20mg MouseBeta-naphthol,β-NphELISA试剂盒小鼠β萘酚(β-Nph)ELISA试剂盒规格：96T/48T

羟基柳杉酚 HPLC≥98% 5mg 小鼠氧化型谷胱甘肽(GSGS)ELISA试剂盒 ，英文名： GSGS ELISA Kit

羰基Β乙酰乳香酸 HPLC≥98% 20mg 小鼠BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)ELISA检测试剂盒MouseBH3ieractingdomaindeathagonist,BidELISAKit 96T/48T

酮基乳香酸 HPLC≥98% 5mg 人己糖激酶3(HK3)试剂盒 human hexokinase 3,HK3 ELISA Kit

去羟基印乌碱 HPLC≥98% 20mg RatBonemorphogeneticprotein7,BMP-7ELISAKit大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒规格：96T/48T
人促红细胞生成素(EPO)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称: Human EPO(Erythropoietin) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组EPO浓度
即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS)人组织转谷氨酰胺酶(TGM2)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:TGM2, G-ALPHA-h, GNAH, HEL-S-45, TG2, TGC, TG(C), transglutaminase 2 Human TGM2(Transglutaminase 2, Tissue) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组TGM2浓度

更新时间：2024/3/7 10:09:29

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