BL21化学感受态细胞

详细内容

本产品是采用BL21菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本产品用作表达载体的宿主，适用于毒性蛋白的表达，适用于不是基于T7启动子的表达系统。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107。

菌株基因型为：BL21 strain E.coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-)gal。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。

以下实验以50μL感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。

3. 42℃热击45，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。

4. 每个离心管中加入450μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养

3. 涂布剩余的。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
银椴苷 HPLC≥98% 20mg 小鼠胰岛素样蛋白3(INSL3)ELISA试剂盒 ，英文名： INSL3 ELISA Kit

银杏酚酸 HPLC≥98% 20mg 兔子白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA检测试剂盒rabbitIerleukin8,IL-8ELISAKit 96T/48T

银杏内酯A HPLC≥98% 20mg 犬催乳素(PRL/LTH)试剂盒 Canine Prolactin/Leoopic Hormone,PRL/LTH ELISA Kit

银杏内酯B HPLC≥98% 20mg 英文名称HumanDPDELISAKit人脱氧吩(DPD)规格：96T/48T

银杏内酯C HPLC≥98% 20mg 大量真菌/酵母细胞基因组DNA化试剂盒10

银杏内酯J HPLC≥98% 20mg Ratisletcellaibody,ICAELISA试剂盒大鼠胰岛细胞抗体(ICA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

银杏双黄酮 HPLC≥98% 10mg 小鼠胰岛素受体底物2(IRS2)ELISA试剂盒 ，英文名： IRS2 ELISA Kit

吲哚醇 HPLC≥98% 20mg 兔子白三烯B4(LTB4)ELISA检测试剂盒rabbitLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 96T/48T

隐丹参酮 HPLC≥98% 20mg 犬促肾上腺皮质激素(ACTH)试剂盒 Canine adrenocoicoopic hormone,ACTH ELISA kit

隐绿原酸 HPLC≥98% 20mg 英文名称HumanDHEA-S-7ELISAKit人脱氢表雄同-S-7(DHEA-S-7)规格：96T/48T
人基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:TIMP2, CSC-21K Human TIMP-2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组TIMP-2浓度
BL21化学感受态细胞人衰老关键蛋白3(FBLN3)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:EFEMP1, DHRD, DRAD, FBNL, FIBL-3, MLVT, MTLV, S1-5 Human FBLN3(Fibulin 3) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组FBLN3浓度

更新时间：2024/1/29 9:46:17

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