详细内容
本产品是采用M15菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,本产品转化效率可达107。本产品具有卡那霉素抗性。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
M15化学感受态细胞 | E.coli M15 Chemical Competent Cell | 0.1mL*10 |
菌株基因型为:lac ara gal mtl recA+ uvr+ [pREP4 lacI kanaR]。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
依列醇钠 HPLC≥98% 20mg 组蛋白H4-K16乙酰化检测试剂盒10/20等
泊苷 HPLC≥98% 20mg Mouseai-zonapellucidaaibody,aZPELISA试剂盒小鼠抗透明带抗体(aZP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
乙酰蝙蝠葛苏林碱 HPLC≥98% 10mg 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)ELISA试剂盒 ,英文名: IGFBP2 ELISA Kit
乙酰丁香酮 GC≥98% 20mg 兔子白介素10(IL-10)ELISA检测试剂盒RabbitIerleukin10,IL-10ELISAKit 96T/48T
乙酰哈巴苷 HPLC≥98% 20mg 犬甘油-3-0酸脱氢酶(GAPDH)试剂盒 Dog Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH ELISA kit
乙酰化白藜芦醇 HPLC≥98% 20mg 英文名称HumanMotilinELISAKit人胃动素(MTL)规格:96T/48T
乙酰黄芪皂苷I HPLC≥98% 10mg 大量全血基因组DNA化试剂盒10
乙酰基二氢美味草素A HPLC≥98% 10mg RatIerleukin6,IL-6ELISA试剂盒大鼠白介素6(IL-6)ELISA试剂盒规格:96T/48T
乙酰蒲公英萜醇 HPLC≥98% 20mg 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
乙酰升麻醇OαL阿拉伯糖苷 HPLC≥98% 20mg Rat monocyte chemotactic protein 3 (MCP-3/CCL7) ELISA Kit 大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒
人大脑糖原磷酸化酶(PYGB)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:PYGB Human PYGB(Glycogen Phosphorylase, Brain) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组PYGB浓度
M15化学感受态细胞人乙酰胆碱酯酶(AChE)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:ACEE, ARACHE, N-ACHE, YT, acetylhydrolase Human AChE(Acetylcholinesterase) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组AChE浓度
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/3/1 9:56:44
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