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点击次数:1016 发布时间:2022/3/15 13:51:13
Tuner(DE3)为常规表达宿主菌,用于一般蛋白表达,lac 透性酶突变,可以精细控制表达水平。无抗性。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
Tuner(DE3)化学感受态细胞 | E.coli Tuner(DE3) Chemical Competent Cell | 0.1mL*10 |
基因型:F–omp T hsd SB(rB– m–)gal dcm lacY1(DE3)
储存条件:干冰运输,-80℃保存,有效期6个月。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
仙鹤草酚B TLC鉴别用 10mg 犬骨成型蛋白7(BMP7)试剂盒 Dog Bone morphogenetic protein 7,BMP7 ELISA kit
仙鹤草酚D HPLC≥98% 20mg 英文名称HumanPAI-1ELISAKit人纤溶酶原激活剂抑制因子1(PAI-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
仙茅苷 HPLC≥98% 20mg 大肠弯曲杆菌(Campylobactercoli)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20
纤精酮 HPLC≥98% 20mg RatIerleukin1α,IL-1αELISA试剂盒大鼠白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒规格:96T/48T
纤细薯蓣皂苷 HPLC-ELSD≥98% 20mg 小鼠胰激肽原酶(PK)ELISA试剂盒 ,英文名: PK ELISA Kit
莶精醇 HPLC≥98% 20mg 小鼠糖皮质类受体(GR)ELISA检测试剂盒Mouseglucocoicoidreceptor,GRELISAKit 96T/48T
腺苷 HPLC≥99% 20mg 人碱性0酸酶(ALP)试剂盒 Human alkaline phosphatase,ALP ELISA Kit
腺嘌呤 HPLC≥98% 20mg RatApolipoproteinH,Apo-HELISAKit大鼠载脂蛋白H(Apo-H)ELISA试剂盒规格:96T/48T
相思豆 HPLC≥98% 20mg 组蛋白H3-K9(mono/di/i)甲基化检测试剂盒10/20等
相思子碱 HPLC≥95% 20mg MouseAi-myocardialaibody,AMAELISA试剂盒小鼠抗心肌抗体(AMA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
人基质金属蛋白酶3(MMP-3)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:MMP3, CHDS6, SL-1, STMY, STMY1, STR1, Stromelysin-1 Human MMP-3(Matrix Metalloproteinase 3) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组MMP-3浓度
Tuner(DE3)化学感受态细胞人胃泌素(GT)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:GAST, GAS, gastrin Human GT(Gastrin) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分重组GT浓度。
更新时间:2024/4/30 10:24:07
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