详细内容
本系列探针是主要对活细胞中的酸性区室(如溶酶体、顶体精子)动态合成和功能进行研究的一类荧光探针,该类探针的染色具有向酸性,可通过质子化作用在酸性细胞器内累积。该类探针的这种质子化作用还可解除染料的荧光淬灭性,使其所发射的荧光强度更强。因此,本系列探针随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强。本品Green DND-189具有较低的pKa值,仅在酸性区室内才具有荧光。本品以溶于无水DMSO的1mM储存液形式提供。如对活细胞中的酸性区室进行选择性标记和染色,可选择SY0569、SY0570探针。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
溶酶体绿色荧光探针 | Lysosome Green DND-189 | 50μl |
分子式:C24H22N4O2
分子量:398.46
Ex/Em:443/505
pKa:~5.2
颜色:绿色
储存条件:-20℃干燥,有效期6个月
大鼠补体片断5a(C5a)elisa分析检测试剂盒
大鼠补体片断5(C5)elisa分析检测试剂盒
大鼠补体片断3a(C3a)elisa分析检测试剂盒
大鼠补体片断3(C3)elisa分析检测试剂盒
大鼠补体蛋白4(C4)elisa分析检测试剂盒
大鼠纤调蛋白(FMOD)elisa检测试剂盒
大鼠纤溶抑制因子(TAFI)elisa检测试剂盒
大鼠纤溶酶原激活物抑制因子2(PAI2)elisa检测试剂盒
大鼠纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)elisa检测试剂盒
大鼠细胞周期素D3(CCND3)elisa检测试剂盒
溶酶体绿色荧光探针人补体因子H(CFH)elisa检测试剂盒
人补体因子H相关蛋白1(CFHR1)elisa分析检测试剂盒
人补体因子H相关蛋白1(CFHR1)elisa检测试剂盒
人补体因子I(CFI)elisa分析检测试剂盒
人补体因子I(CFI)elisa检测试剂盒免费代测
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/2/2 9:12:44
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