详细内容
点击次数:1008 发布时间:2022/3/7 11:12:35
保存:置4℃。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅳ(CY3) |
| 100T |
工作量:100 张切片。
有效期:一年。
所谓原位杂交是指借助于核酸分子杂交的方法,在显微镜水平检测和定位特异的核苷酸片段。现在原位杂交已成为在分子水平研究肿瘤和遗传性疾病的发生,发展和调控等根本性问题的有力工具,其作用是免疫组化所无法代替的。 具有敏感性特高,操作简便和结果准确的优点。该试剂盒用于 mRNA的杂交,不推荐使用每个探针分子仅标记一个的寡核苷酸探针。
如果使用 cDNA 探针,应在杂交之变性探针。
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗 5ml;
6.SABC-CY3 100ul(1:100)
大鼠丙二酸单酰辅酶A(malonyl CoA)elisa检测试剂盒
大鼠丙二醛(MDA)elisa检测试剂盒
大鼠丙氨酸转氨酶(ALT)elisa检测试剂盒
大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)elisa检测试剂盒
大鼠别孕烯醇酮/3α,5α-四氢孕酮(AP/3α,5α-THP)elisa检测试剂盒
大鼠细胞色素P450(CYP450)elisa检测试剂盒
大鼠细胞色素P450 3A4(CYP3A4)elisa检测试剂盒
大鼠细胞色素P450 1A1(CYP1A1)elisa检测试剂盒
大鼠细胞色素C氧化酶(COX)elisa检测试剂盒免费代测
大鼠细胞色素C(Cyt-C)elisa检测试剂盒
敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅳ(CY3)人玻连蛋白(VTN)elisa分析检测试剂盒
人玻连蛋白(VTN)elisa检测试剂盒
人补体1q(C1q)elisa分析检测试剂盒
人补体1q(C1q)elisa检测试剂盒
人补体1抑制物抗体-IgG(C1INH-IgG)elisa分析检测试剂盒
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/1/19 9:52:03
留言框 | |
感兴趣的产品: | * |
您的单位: | * |
您的姓名: | * |
联系电话: | * |
详细地址: | |
常用邮箱: | |
您的任何要求、意见或建议: * |
|
验证码: | * |
请输入要搜索的关键词
上海谷研实业有限公司:elisa试剂盒,细胞,标准品,菌种
地址:上海市嘉定区嘉罗公路1661号23号楼311 电话:021-39596320 传真: 技术支持:阿仪网 总访问量:3021514