详细内容
点击次数:1037 发布时间:2022/3/7 11:11:36
Fluo-3,AM ester是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3,AM ester进入细胞后可以被细胞内源性酯酶剪切形成Fluo-3,从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光,大激发波长为506nm,大发射波长为526 nm。Fluo-3,AM ester的一个重要作用是其在高通量药物筛选中的应用。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
钙离子荧光探针Fluo 3-AM | Fluo 3-AM | 100μg|1mg |
CAS:121714-22-5
分子式:C51H50Cl2N2O23
分子量:1129.85
纯度:≥90%(HPLC)
外观:红色粉末
储存条件:-20℃干燥避光保存,有效期12个月
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
大鼠丙二醛 (MDA)elisa检测试剂盒
大鼠丙二醛 (MDA)elisa检测试剂盒
大鼠补体C3a(C3a)elisa检测试剂盒
大鼠补体C5a(C5a)elisa检测试剂盒
大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)elisa检测试剂盒
大鼠细胞色素b5 elisa检测试剂盒
大鼠细胞膜钙转运ATP酶1(ATP2B1)elisa检测试剂盒
大鼠细胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)elisa检测试剂盒免费代测
大鼠细胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)elisa检测试剂盒
大鼠细胞间粘附分子3(ICAM-3)elisa检测试剂盒
钙离子荧光探针Fluo 3-AM人丙型肝炎IgM(HCV-IgM)elisa检测试剂盒免费代测
人丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原(HCV core Ag)elisa分析检测试剂盒
人丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原(HCV core Ag)elisa检测试剂盒
人并殖吸虫抗体(IgG)elisa分析检测试剂盒
人并殖吸虫抗体(IgG)elisa检测试剂盒
更新时间:2023/11/16 9:31:42
留言框 | |
感兴趣的产品: | * |
您的单位: | * |
您的姓名: | * |
联系电话: | * |
详细地址: | |
常用邮箱: | |
您的任何要求、意见或建议: * |
|
验证码: | * |
请输入要搜索的关键词
上海谷研实业有限公司:elisa试剂盒,细胞,标准品,菌种
地址:上海市嘉定区嘉罗公路1661号23号楼311 电话:021-39596320 传真: 技术支持:阿仪网 总访问量:3021514