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Fluorescein diacetate即FDA,中文名为二乙酸荧光素,是一种具细胞膜渗透性的酯酶底物,常用作细胞活力分析。不仅可以测定酯酶活力,因FDA需要在酯酶的催化下才能活化产生绿色荧光;而且还可用来鉴定细胞膜完整性,只有在完整膜内才能维持荧光。也可用于流式分析。大激发波长(Ex)和发射波长(Em)分别为490nm和526nm。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
二乙酸荧光素 | Fluorescein diacetate(FDA) | 1g|5g |
另外,FDA还有一些其他用途:
1)细胞内相互作用研究;
2)作为底物,用于组织化学酯酶检测;
3)用于分离的肝细胞中线粒体电位研究等。
英文别名:Cellstain-FDA; 3,6-Diacetoxyfluoran; Di-O-acetylfluorescein;
中文别名:荧光素二乙酸酯;二乙酸荧光素酯;荧光素双醋酸酯;
CAS:596-09-8
分子式:C24H16O7
分子量:416.39
熔点:204-210℃
纯度:>98%(HPLC)
溶解性:溶于,DMSO,乙醇,微溶于水
储存条件:-20℃避光干燥。
大鼠白细胞介素2(IL-2)elisa检测试剂盒
大鼠白细胞介素1β(IL-1β)elisa检测试剂盒
大鼠白细胞介素1β(IL-1B)elisa检测试剂盒
大鼠白细胞介素1α(IL-1α/IL-1F1)elisa检测试剂盒
大鼠白细胞介素1α(IL-1α)elisa检测试剂盒
大鼠尾加压素2受体(UTS2R)elisa检测试剂盒
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大鼠维甲酸受体α(RARα)elisa检测试剂盒
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二乙酸荧光素人胞浆型磷脂酶A2-α(cPLA2-α)elisa检测试剂盒
人胞外超氧化物歧化酶(SOD3)elisa分析检测试剂盒
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人胞质动力蛋白(CD)elisa分析检测试剂盒
人胞质动力蛋白(CD)elisa检测试剂盒
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2023/12/25 10:01:13
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