详细内容
DiI,DiO,DiD,DiR是一系列亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构,这是一类环境敏感型荧光染料,当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质,虽然在水中其荧光强度很弱)结合时,其荧光强度显著增强。这类染料具有很高的摩尔消光系数,性依赖性的荧光和很短的激发寿命。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
细胞膜红色荧光探针 | DiD Perchlorate (DiIC18(5)) | 25mg |
DiD是DiI的衍生物,具有明显往红光迁移的激发和发射光谱,这一特性使其特别适合标记具显著自荧光效应的细胞或组织。DiD可被633nm的氦-氖(He-Ne)激光所激发,呈红色荧光,在进入细胞膜之荧光非常弱,当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,进入细胞后,染料在整个细胞膜上扩散,佳浓度时可以使整个细胞染色。
分子式:C61H99ClN2O4
分子量:959.91
Ex/Em(nm):644/663
推荐滤光器:XF47-Omega,31023-Chroma
外观:红色或紫色或深蓝色固体
纯度:>97%(TLC)
溶解性:溶于DMF,DMSO,甲醇
储存条件:-20℃避光干燥,有效期24个月
大鼠白介素21(IL-21)elisa检测试剂盒
大鼠白介素20(IL-20)elisa检测试剂盒
大鼠白介素2(IL-2)elisa检测试剂盒
大鼠白介素2(IL-2)elisa检测试剂盒
大鼠白介素1受体样1(IL1RL1)elisa检测试剂盒
大鼠糖原合成酶激酶(GSK)elisa检测试剂盒
大鼠糖原合成酶elisa检测试剂盒
大鼠糖缺失性转铁蛋白(CDT)elisa检测试剂盒
大鼠糖皮质类固醇受体(GR)elisa检测试剂盒免费代测
大鼠糖类抗原199(CA199)elisa检测试剂盒
细胞膜红色荧光探针人白介素-21(IL-21)elisa检测试剂盒
人白介素22(IL-22)elisa分析检测试剂盒
人白介素22(IL-22)elisa检测试剂盒
人白介素23(IL-23)elisa分析检测试剂盒
人白介素23(IL-23)elisa检测试剂盒
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2023/11/22 9:53:21
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