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点击次数:1037 发布时间:2022/3/7 10:46:14
Fluo-2 早是由Roger Tsien 博士发明的钙离子指示剂Fluo 系列,目,Fluo-3 和Fluo-4 已成熟商品化。然而,Fluo-2 在细胞内比Fluo-4 要更明亮,主要可能是由于大部分细胞对FLuo-2 的加载能力要高于FLuo-4。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
Fluo-3, AM(Ca2+ GPCR分析-钙离子指示探针) | Fluo-3, AM | 1mg |
Fluo-3 成像涉及到钙离子信号通路的多个方面,Fluo-3 经常应用在流式细胞术上,如螯合剂光活化、第二信使、神经递质以及细胞水平的药理筛选。Fluo-3 在这些应用里之所以能大量运用主要是由于其几个重要特性:Fluo-3 可以被氩离子激光器488nm 激发,并在与Ca2+结合后,发射荧光很明亮的荧光信号。Fluo-4 是Fluo-3 以两个氟原子取代氯原子的类似物,这一微小的结构变化使得Fluo-4探针在488nm 激发光下的荧光信号得到增强,信号稳定持续,可以应用于共聚焦显微镜、流式细胞仪、微孔板读数仪。
Fluo-2、Fluo-3 和Fluo-4 在与Ca2+结合后荧光增强,与紫外激发的探针fura-2 和indo-1 不同,不会发生光谱漂移。荧光光密度在与Ca2+结合后,增强至少100 倍。
储存:-20℃,避光,有效期12个月。
大鼠白介素17(IL17)elisa检测试剂盒
大鼠白介素16(IL16)elisa检测试剂盒
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产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/1/11 11:03:32
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