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点击次数:1009 发布时间:2022/3/7 10:40:08
本试剂盒是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3′端添加dNTP尾巴的原理而设计
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒 | TdT-Tailing DNA Labeling Kit | 5次 |
产品特点:
1.快速,15分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记,还可用于3′突出的双链DNA标记,但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带标记核苷酸三种选择。
5. 同时提供非标记的dATP,用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
注:A型用于自选标记,用户需自备标记核苷酸,本产品不提供标记核苷酸;B型提供5μl Biotin-11-dUTP;C型提供含5μl DIG-11-dUTP。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
大鼠阿立新A(Orexin A)elisa分析检测试剂盒
大鼠阿黑皮素原(POMC)elisa分析检测试剂盒
大鼠δ氨基乙酰丙酸脱水酶(ALAD)elisa分析检测试剂盒
大鼠γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)elisa分析检测试剂盒
大鼠γ干扰素受体(IFN-γR)elisa分析检测试剂盒
大鼠嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)elisa检测试剂盒
大鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)elisa检测试剂盒
大鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)elisa检测试剂盒
大鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1)elisa检测试剂盒
大鼠嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)elisa检测试剂盒
TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒人β-转导素重复序列包含蛋白(BTRC)elisa检测试剂盒
人γ氨基丁酸(GABA)elisa分析检测试剂盒
人γ氨基丁酸(GABA)elisa检测试剂盒
人γ-氨基丁酸(GABA)elisa检测试剂盒
人γ分泌酶elisa分析检测试剂盒
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/5/15 9:30:04
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