详细内容
核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交,由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子(靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术,应用非常广泛。由于核酸杂交效率受印迹膜种类、杂交温度、探针浓度、杂交液离子强度、杂交液pH及杂交液粘度等因素影响,
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
超杂交液(含50%甲酰胺) | Super hybrid solution(with 50% formamide) | 100mL |
产品特点:
1. 既可用于Southern杂交(靶分子为DNA),也可用于和Northern杂交(靶分子为RNA),还可以用于菌落杂交,基因芯片等杂交。
2. 既可以用于同位素探针的杂交,也可以用于非同位素探针的杂交。
3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探针,也可以使用RNA探针(包括RNA Oligo)
4.含多种能够促进杂交的聚合物,使杂交反应能在6~12小时完成,而常规杂交反应一般需要12~24小时。
5.含多种封堵剂,能阻印迹膜对探针分子的非特异性吸附,能有效降低背景信号,延长曝光时间以便检测到低拷贝的RNA(Northern)和单拷贝的基因(Southern)。
6. A型不含甲酰胺,B型含50%的甲酰胺。后者使杂交在较低温度就可以完成,适合Tm 较高的分子杂交(如RNA-RNA和RNA-DNA杂交)。
7.跟各种常用的印迹膜兼容,包括硝酸纤维素膜和尼龙膜。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。本产品属于高盐溶液,低温下产生沉淀,必须在65℃加热溶解并充分摇匀后才能使用。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
大鼠β-防御素(β-Defensins)elisa检测试剂盒
大鼠β防御素(β-Defensin)elisa检测试剂盒
大鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)elisa检测试剂盒
大鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ 1-42)elisa检测试剂盒
大鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)elisa检测试剂盒
大鼠神经营养因子4(NT-4)elisa检测试剂盒
大鼠神经营养因子3(NT-3)elisa检测试剂盒
大鼠神经营养的酪氨酸激酶1型受体(NTRK1)elisa检测试剂盒
大鼠神经型一氧化氮合成酶(nNOS/NOS1)elisa检测试剂盒
大鼠神经型NO合酶(nNOS)elisa检测试剂盒
超杂交液(含50%甲酰胺)人β4整合素(ITG β4/CD104)elisa检测试剂盒
人β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)elisa分析检测试剂盒
人β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)elisa检测试剂盒
人β半乳糖苷酶(βGAL)elisa分析检测试剂盒
人β-半乳糖苷酶(β-GAL)elisa检测试剂盒
更新时间:2023/11/21 10:55:05
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