详细内容
本产品为即用型Oligo探针用核酸杂交液。核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交,由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子(靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术,应用非常广泛。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
超杂交液(Oligo探针) | Super hybrid solution(Oligo probe) | 10mL |
产品特点:
1. 既可以用于DNA Oligo探针,也可以用于RNA Oligo探针。
2. 即开即用,使用方便。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
大鼠β防御素(β-Defensin)elisa检测试剂盒
大鼠β内啡肽β-EP elisa检测试剂盒
大鼠γ-氨基丁酸(GABA)elisa检测试剂盒
大鼠γ-分泌酶(GACE)elisa检测试剂盒
大鼠γ-干扰素(IFNγ)elisa检测试剂盒
大鼠神经型一氧化氮合酶(NOS1)elisa检测试剂盒
大鼠神经纤维网蛋白1(NRP1)elisa检测试剂盒
大鼠神经突蛋白1(NRN1)elisa检测试剂盒
大鼠神经调节素2(NRG2)elisa检测试剂盒
大鼠神经调节素1(NRG1)elisa检测试剂盒
超杂交液(Oligo探针)人β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)elisa分析检测试剂盒
人β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)elisa检测试剂盒免费代测
人β2转铁蛋白(β2TF)elisa分析检测试剂盒
人β2转铁蛋白(β2TF)elisa检测试剂盒
人β4整合素(ITG β4/CD104)elisa分析检测试剂盒
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/1/24 9:16:44
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