生物素标记DNA试剂盒(TdT加尾法)

详细内容

本试剂盒是一种通过TdT酶把生物素标记的dUTP添加到DNA 3＇末端的试剂盒。通常DNA的3＇末端被标记后不会干扰杂交反应，也不会干扰基于序列特异性蛋白结合的EMSA检测，因此生物素标记的DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、EMSA(即gel shift)以及colony hybridization或原位杂交等。

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase(TdT)可以在不依赖于模板的情况下催化在DNA的3＇-OH端加上dNTP的反应。关于TdT催化双链DNA末端加dNTP的反应效率，3＇端突出的双链DNA要比平端或3＇端缩进的双链DNA高很多。TdT催化单链DNA末端加dNTP的反应效率要比双链DNA高很多。在适当的条件下，TdT也可以催化RNA 3＇末端加NTP的反应。

本试剂盒适合标记纯化的单链DNA，如用于标记EMSA探针，可在单链标记后再进行退火。本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control Oligo，可以用作检测DNA标记效率的对照。

储存条件：-20℃。

规格说明：

如果每个标记反应的探针量为5pmol，本试剂盒可以用于20个标记反应。

注意事项：

需自备用于检测探针标记效率的带正电荷尼龙膜，以及用于生物素检测的相关试剂。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
大鼠α-胞衬蛋白(SPTAN1)elisa检测试剂盒

大鼠α白蛋白(AFM)elisa检测试剂盒

大鼠α2-纤溶酶抑制因子(α2PI)elisa检测试剂盒

大鼠α2-巨球蛋白(α2M)elisa检测试剂盒

大鼠α2-HS糖蛋白(αHSG)elisa检测试剂盒
大鼠上皮性钙黏附蛋白(CDHE)elisa检测试剂盒

大鼠色胺酸羟化酶2(TPH2)elisa检测试剂盒

大鼠色胺酸羟化酶1(TPH1)elisa检测试剂盒

大鼠三叶因子3(TFF3)elisa检测试剂盒

大鼠三叶因子2(TFF2)elisa检测试剂盒
生物素标记DNA试剂盒(TdT加尾法)人αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)elisa分析检测试剂盒

人αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)elisa检测试剂盒

人αL岩藻糖苷酶(AFU)elisa分析检测试剂盒

人αL岩藻糖苷酶(AFU)elisa检测试剂盒

人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)elisa分析检测试剂盒

更新时间：2024/4/9 9:50:14

快速询价

留言框
感兴趣的产品：	*
您的单位：	*
您的姓名：	*
联系电话：	*
详细地址：
常用邮箱：
您的任何要求、意见或建议： *
验证码：	*