对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
黑化大家鼠肺成纤维细胞;NRm品牌【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
黑化大家鼠肺成纤维细胞;NRm品牌【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
黑化大家鼠肺成纤维细胞;NRm品牌实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
L-甘-甘-异白三肽100克RT,避光
Peptonepeef 500g 国产
偏硅酸钠,英文名或英文缩写:wo7ium metasilicate nonahydrate,级别:CP,70%,规格:5克
胆红速(+4℃) Bilirubin 632-62-4
1-溴代正辛烷,英文名或英文缩写:1-Bromooctane,级别:AR,47.8%,规格:100克
铝箔shēng huà shì jì容量:1公斤
32222-06-3钙三醇1A25-dixy7noxycholecalciferol(+4℃)
1-(4-Carboxybutyl)indole-5-boronic acid 1072946-60-1
2-乙酰噻吩 2-Acetylthiophene,≥99.0% 88-15-3 25G 多肽试剂
HalfFraser培养基100克
免疫血清兔抗人血清shēng huà shì jì容量:RT1公斤
肝素钠(分析实验用)(冷藏运输)NA
1-Hexylboronic acid pinacol ester 86308-26-1
2,3,5-三溴噻吩 2,3,5-Tribromothiophene ,≥98% 3141-24-0 5G 多肽试剂
OGY琼脂5克
三糖铁琼脂(TSI)22080250g用于鉴别肠道菌发酵蔗糖、乳糖、葡萄糖及产生的生化反应
12206 猪丹毒疫苗培养基 1 万 ml/袋 用于制造猪丹毒灭活菌苗、活菌苗 incubation media 12206 猪丹毒疫苗培养基 1 万 ml/袋 用于制造猪丹毒灭活菌苗、活菌苗
RoseBengalMedium
Egg-YolkMannitolSaltagarBase
幽门螺旋杆菌固体培养基 250g 用于幽门螺杆菌的分离培养
黑化大家鼠肺成纤维细胞;NRm品牌抗生素检定培养基7号(05药典)250g用于头孢噻肟等的效价测定
梭菌增菌培养基 250(g) incubation media 梭菌增菌培养基 250(g)
EVA肉汤 EVA Broth 250克 用于链球菌的增菌培养
改良Skirrow氏琼脂基础250用于空肠弯曲菌的分离培养(SN、GB标准)incubationmedia改良Skirrow氏琼脂基础250用于空肠弯曲菌的分离培养(SN、GB标准)
胰胨大豆琼脂斜面(TSA) 250g 培养副溶血性弧菌,做细胞色素氧化酶实验(SN标准)
注意事项: