1. 收到 大鼠骨髓瘤细胞;Y3-Ag 1.2.3图片后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称 大鼠骨髓瘤细胞;Y3-Ag 1.2.3图片
特征特性 这是C. Milstein建立的骨髓瘤细胞株S210的衍生株。 未经C. Milstein同意不得销售或提供给第三方。 这株细胞具8-氮鸟嘌呤抗性,HAT敏感,可与大鼠B细胞融合生产大鼠-大鼠杂交瘤。 检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
大鼠骨髓瘤细胞;Y3-Ag 1.2.3图片【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
大鼠骨髓瘤细胞;Y3-Ag 1.2.3图片【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
大鼠骨髓瘤细胞;Y3-Ag 1.2.3图片实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
pL-蚕丝基酸,英文名或英文缩写:L-Serine,级别:BR,99%,规格:10克
1314-36-9氧化钇(阴凉)Yttrium oxide
CHAPSCHAPS超纯级白色结晶粉末RTsigma
3-甲基-4-硝基苯甲醚 3-Methyl-4-nitroanisole,97% 5367-32-8 5G 通用试剂
银/Silver sulfate AR,99.7% 25克 国产/进口
免疫血清兔抗人γ链shēng huà shì jì容量:500克
CollagenTypeI 500mg/1g/5g/10g Sigma C9879
四乙酰核糖500克
茜速皇R;队肖基本偶氮水杨醋或内盐 clizcrin yqllow R;clizcrin yqllow RW;clizcrin orcngq;2-xy7noxy-5-[(4-nitnophqnyl)czo]bqnzoic ccid;5-(p-nitnophqnylczo)sclicylic ccid;C.I.Mordcnt orcngq 1、C.I. 14030; 1718-34-9
环孢菌速分离度用混合物;环孢速分离度用混合物 Cyclosporinq Rqsolution Mixturq 29862-13-3
脲,英文名或英文缩写:Urea,级别:HPLC,99.7%,规格:500克
769-42-61.3-二甲基酸1,3-Dimetxylbarbituric acid
URIDINE尿苷超纯级
2-典本加醋;邻典本加醋 2-Iodobqnzoic ccid; 88-67-2
SUCROSEGELLOADINGDYE,5X5X核酸电泳上样缓冲液,40%蔗糖超纯级5MLCOLD
NTMMedium
50070 酵母浸膏 BR 500g 培养基原材料,含有丰富的B族维生素、氨基酸 incubation media 50070 酵母浸膏 BR 500g 培养基原材料,含有丰富的B族维生素、氨基酸
浮游球衣菌 食用 支/瓶
大鼠骨髓瘤细胞;Y3-Ag 1.2.3图片AmiesTransportMedium
YMMedium
精酸双水解酶(绿脓杆菌)20支绿脓杆菌用
液体硫乙醇酸盐培养基(FTM) 无菌实验的厌氧菌和需氧菌培养 100mL*25 incubation media 液体硫乙醇酸盐培养基(FTM) 无菌实验的厌氧菌和需氧菌培养 100mL*25
单增李斯特菌 产乳酸和延胡索酸 支/瓶
血平皿(9cm)用于一般细菌的分离、培养和溶血试验
高盐察氏琼脂 250g 用于霉菌和酵母菌的计数(GB标准)