特征特性 RBL-2H3是1978年国立牙科研究所的免疫学实验室从Wistar大鼠保持肿瘤状态的嗜碱性细胞中分离和克隆出来的嗜碱性白血病细胞株。 这些细胞具有高亲和力的IgE受体。 通过集聚这些受体或与钙离子载体协同作用可以激活它们分泌组胺及其他递质。 这株细胞广泛地用于研究肥大细胞FcERI和分泌的生化途径。 RBL-2H3细胞是研究FcERI结构的模型。 它们广泛地用于研究细胞分泌的不同方面,包括细胞内钙浓度改变、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G蛋白的作用。 虽然几乎所有批号的FBS都支持细胞的生长,但在某些批号
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 优质热灭活胎牛血清,15%
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-2H3品牌【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-2H3品牌【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-2H3品牌实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
Lysozymechloride溶菌酶录化物5克高纯,1:10000
(+)-Arabinose
L-ASCORBICACID抗坏血酸(维生素C)美国药典级白色结晶粉末RTsigma
皇 ccid Yqllow 23 1934-1-0
羊抗猪IgG (HRP标记) Anti-Pig IgG-HRP antibody produced in ... Null 0.2ML HRP酶标抗体
木寡糖,英文名或英文缩写:xylo-oligosaccharides,级别:高纯,98%,规格:100克
34622-08-7三扶甲磺酸钕NEODYMIUM(III) TRIFLUOROmetxANESULFONATE
YEASTnitnOGENBASEWITHOUTAMINOACIDS&AMMONIUMSULFATE酵母氮源(YNB),不含基酸,不含细菌学级淡黄色至浅褐色粉末RTsigma
2--3-甲醛 2-Chloro-3-pyridinecarboxaldehyde,97% 36404-88-3 1G 通用试剂
磷酸三正丁酯/磷酸正丁酯/磷酸三正丁酯/三丁基磷酸盐/磷酸三丁脂/TBP AR,98%, 500毫升 国产/进口
牛血清白蛋白(第五组份)25克RT
BetaineHCl 100g/250g/1kg原装 Amresco K186
铋芬,英文名或英文缩写:Bismuth,级别:TLC,规格:25克
高铼醋铵;过铼醋铵 cMMoniuM pqrrhqnctq 13298-62-7
(大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-2H3品牌S)-2-本丙醇,英文名或英文缩写:L-pxenylalaninol,级别:BR,98%,规格:5克
脱脂奶蔗糖胰蛋白胨琼脂250g用于致病性嗜水气单胞菌的鉴别培养
50327 麦芽提取粉 BR 400g 培养基原材料,特制适用于培养酵母菌 incubation media 50327 麦芽提取粉 BR 400g 培养基原材料,特制适用于培养酵母菌
海滨芽孢杆菌 产肌苷酸 支/瓶
TerrificBroth
野生酵母培养基 250g 用于野生酵母计数培养
FBP溶液支每支添加于HB0242中
胰胨大豆胨固绿琼脂 Tryptic Soy Fast Green Agar 用于滤膜细菌总数的测定和分离培养(NEOGEN方法)
YPD琼脂 Yeast Peptone Dextrose Agar 250 用于测定酵母菌总数(GB标准)
ITC肉汤基础250g/瓶用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的选择性增菌,每培养基中添加06cubationmediaITC肉汤基础250g/瓶用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的选择性增菌,每培养基中添加0610
0.85%SterileSaline
注意事项: