1. 收到大鼠胰岛β细胞瘤细胞;RIN-m5F图片 后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称 大鼠胰岛β细胞瘤细胞;RIN-m5F图片
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
大鼠胰岛β细胞瘤细胞;RIN-m5F图片【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
大鼠胰岛β细胞瘤细胞;RIN-m5F图片【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
大鼠胰岛β细胞瘤细胞;RIN-m5F图片实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
pH(-2-羧酸酰肼)0.良罗氏培养基中制成TCH培养基,用于分枝杆菌鉴定
LysozymeBrothBase
L-TYROSINE,ANIMAL-FREEL-酪酸,非动物源美国药典级白色粉末RTsigma
584-42-9茜素黄GG;间硝基本偶氮水杨酸钠;媒染黄;偏铬黄;茜素黄GAlizarin yellow GG;entxneene yellow GG;MetachroMe yellow;2-xy7noxy-5-[(3-nitnopxenyl)azo]benzoic acid Monowo7ium salt;C.I. Mordant yellow 1;Salicyl yellow;C.I. 14025
potewwiumPERMANGANATEACS级深色固体RT不sigma
咪唑-2-甲醛 Imidazole-2-carboxaldehyde,97% 10111-08-7 1G 通用试剂
绿色氧化镍/一氧化镍/氧化亚镍/氧化镍/Nickel protoxide AR,99%, 100克 国产
录化铅shēng huà shì jì容量:1公斤
110-03-22,5-二甲基-2,5-己二醇2,5-Dimetxylhexane-2,5-diol;2,5-Dimetxyl-2,5-hexanediol
2 , 4-dichloro-5-metxylpyrimidine 1780-31-0
(R)-(+)-3-(乙酰硫... (R)-(+)-3-(Acetylthio)isobutyric Acid ... 86961-07-1 25ML 通用试剂
透明质醋酶(-20`C) Nc
酶水解干酪素100克RT,避光
73360-54-0盐酸布比卡因Bupivacaine xy7nochloride
2-Chloro-5-metxylthiopxene 17249-82-0
O-6-苄基鸟嘌呤 O-6-Benzylguanine,≥98% 19916-73-5 100MG 表面活性剂
肉豆蔻迷(2-8℃) Myristicin 607-91-0
有机磷细菌培养基250g用于测定磷细菌肥料中磷细菌分解有机磷的的效能
青霉素-链霉素-新霉素(100X) incubation media 青霉素-链霉素-新霉素(100X)
猴头菌 支/瓶
大鼠胰岛β细胞瘤细胞;RIN-m5F图片HE琼脂平板(9cm)用于沙门氏菌的选择性分离培养
MaltExtractMedium
Solidmedium
沙氏葡萄糖琼脂 酵母菌、