特征特性 该细胞系来自可移植的雄性大鼠的肾上腺嗜铬细胞瘤;表达神经生长因子(NGF)受体,NGF可诱导该细胞产生可逆性的神经表型。该细胞可产生儿茶酚胺、多巴胺和去甲肾上腺素,但不合成肾上腺素。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞;PC-12 [PC12]图片【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞;PC-12 [PC12]图片【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞;PC-12 [PC12]图片实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
L-OrnithineetxylesterDixy7nochlorideL-鸟酸乙酯盐酸盐10克BR,99%
9028-88-0乙醛脱氢酶ALDEHYDE DExy7noGENASE FROM BAKER S
4-bromo-Benzo[b]thiopxene 5118-13-8
碳酸丙烯酯 Propylene te,99% 108-32-7 100ML 通用试剂
那格列奈相关物质C Nctqglinidq Rqlctqd CoMpound C;N-(cis-4-isopropylcyclohqxcnqccrbonyl)-D-phqnylclcninq 102816-06-6
碱式乙酸铝shēng huà shì jì容量:100克
10526-80-4磷酸烯醇酸单环己铵盐(+4℃)Phosphoenolpyruvic acid cyclohexylammonium salt
葡聚糖T20shēng huà shì jì容量:保存:-20℃200u
异丁香酚甲醚 Methyl isoeugenol,≥98% 93-16-3 25ML 通用试剂
邻本二加醋二异壬酯 Diisononyl phthclctq 8223-1-0
卡莫司汀shēng huà shì jì容量:25克
120-72-9吲哚;氮茚;2,3-本并吡咯Indole
青霉素链霉素溶液shēng huà shì jì容量:25克
绵羊IgG IgG from sheep serum (≥95%, SDS-PAGE) Null 10MG 免疫试剂
庚二酸/蒲桃酸/1,5-戊烷二羧酸/Pimelic acid BR,98% 25克 国产/进口
EF-ar
Liquidmedium
球显色培养基 Staphylococcus Chromogenic Medium 1000ml 用于球菌的显色培养
阪崎肠杆菌显色培养基l/瓶用于阪崎肠杆菌的分离,24h内出结果,阪崎肠杆菌显蓝绿色incubationmedia阪崎肠杆菌显色培养基l/瓶用于阪崎肠杆菌的分离,24h内出结果,阪崎肠杆菌显蓝绿色
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞;PC-12 [PC12]图片PH6.8磷酸盐缓冲液 500ml/瓶 用于样品稀释处理
BacillusMegatheriumMedium
弧菌显色培养基 用于菌、副溶血弧菌的分离和鉴别 1000ml incubation media 弧菌显色培养基 用于菌、副溶血弧菌的分离和鉴别 1000ml
类红红细菌 培养基测试,肠道研究,新兴传染病研究 支/瓶
LST
甘露醇氯琼脂培养基 250g 用于球菌选择性分离培养
注意事项: