1. 收到 猪肾细胞;PK-15品牌后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称 猪肾细胞;PK-15品牌
特征特性 PK-15细胞建系于1955(Stice,E)。是PK-1a细胞的克隆系。该细胞系可用于多种病毒的增值及特性研究。另外,电镜观察发现,PK-15细胞内有C-型病毒颗粒存在,是研究C-型病毒的材料。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
猪肾细胞;PK-15品牌【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
猪肾细胞;PK-15品牌【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
猪肾细胞;PK-15品牌细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
猪肾细胞;PK-15品牌实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
pMaltotrioseD-麦芽三糖1克超纯,98%
130-13-24-基-1-磺酸钠盐wo7ium 4-amino-1-sulfonate
DL-正亮酸shēng huà shì jì容量:RT25克
3-溴丙胺盐 3-Bromopropylamine hydrobromide,≥97.0% 5003-71-4 25G 通用试剂
辽东楤木皂苷X Araloside X (≥98%,HPLC) Null 20MG 标准品
对硝基本基-β-D-半乳糖苷shēng huà shì jì容量:RT25克
7440-69-9铋BisMuth
聚丙烯酸钠100毫克保存:-20℃
DL-酪酸 DL-Tyrosine,99% 556-03-6 25G 通用试剂
肉豆蔻醋异炳酯;十四醋异炳酯;十四醋1-基基酯 Isopropyl Myristctq;Isopropyl tqtrcdqccnoctq 110-7-0
他酮,英文名或英文缩写:Furaltadone,级别:BR,98%,规格:1KU
BOTTLE YEAST EXT GLUCOSE CHLOR 500G
甘酰-脯酰-对硝基本对磺酸盐,英文名或英文缩写:GPDA,级别:BR,99%,规格:1克
胆甾醇乙酸脂 Cholesteryl acetate,97% 604-35-3 25G 通用试剂
L-组酸 (标准品) L-Histidine Standard Substance (≥99.9%) 71-00-1 1G 标准品
PolymyxinB
哥伦比亚MUG培养基 Columbia- MUG Medium 用于的荧光检测(SN标准)
伊红美蓝琼脂(EMB) Eosin-Methylene Blue Agar 250 弱选择性培养基,用于肠道菌的选择性分离
碱性蛋白胨水250g/瓶用于致病性嗜水气单胞菌的培养incubationmedia碱性蛋白胨水250g/瓶用于致病性嗜水气单胞菌的培养
SD-39Agar
(脑)心浸液琼脂250g本产品主要用于培养营养要求高的细菌,是一款营养极其丰富的培养基。
M猪肾细胞;PK-15品牌1Medium
吲哚培养基 Indole Medium 10 生化培养基,用于细菌靛基质试验,亦称色氨酸肉汤(SN标准)
改良Minca培养基基础250g/瓶用于大肠埃希氏菌K88、K99、987P菌株,每升培养基中需添加5ml甘油incubationmedia改良Minca培养基基础250g/瓶用于大肠埃希氏菌K88、K99、987P菌株,每升培养基中需添加5ml甘油
改良月桂基盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素,(mLST-Vm) 300ml/袋*10 用于阪崎杆菌选择性增菌培养