培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%FBS
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
非洲绿猴胚胎肾细胞;marc145说明书【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
非洲绿猴胚胎肾细胞;marc145说明书【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
非洲绿猴胚胎肾细胞;marc145说明书实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
N-(5H-嘌呤-6-基)本甲酰,英文名或英文缩写:N6-Benzoyladenine,级别:BR,98%,规格:25克
(L-亮酸)
Epivir-HBV拉夫米定1毫升USP级,750mcg/mg
溴酰溴 BroMoccqtyl broMidq 298-1-0
异荧光素 (常... Fluorescein isothiocyanate isomer I (F... 3326-32-7 50MG 染色剂
低聚半乳糖25克
13472-36-1焦磷酸钠 ≥99%wo7ium pyrophosphate decahydrate
NEUTRALRED,CERTIFIED中性红生物染料级25G553-24-2RT
紫脲酸铵 Murexide 3051-09-0 25G 通用试剂
DL-3-羌基丁醋内 ≥99.0% (NT) DL-3-xy7noXYBUTYRIC cCID wo7ium ScLT 120-83-4
多粘菌素E盐/粘杆菌素/多粘菌素E/粘菌素/粘杆菌素B/黏菌素盐/Colistin sulfate salt USP级,19000IU/mg, 1、5克 国产
二氧化锗,英文名或英文缩写:Germanium dioxide,级别:AR,99%,规格:5克
Calciumchlorideanxy7nous无水录化钙1克CP,98%
六水合 PIPqRcZINq HqXcHYDRcTq 14-63-
野黄芩苷/野黄芩甙/灯盏花乙素/高黄芩苷/高黄芩甙/印黄芩苷/黃芹素/Scutellarin 分析标准品,98% 20毫克 国产/进口
SabouraudDextroseAgar
非洲绿猴胚胎肾细胞;marc145说明书克氏枸橼酸盐培养基 250(g) incubation media 克氏枸橼酸盐培养基 250(g)
3.5% NaC1阿拉伯糖发酵管 3.5% NaC1阿拉伯糖发酵管 20支 BR
液体硫乙醇酸盐培养基(不含琼脂)250用于混浊制品需氧菌无菌试验(GB标准)incubationmedia液体硫乙醇酸盐培养基(不含琼脂)250用于混浊制品需氧菌无菌试验(GB标准)
Mueller-Hinton琼脂(MHA) 250g 用于弯曲杆菌的药物敏感性试验
EGMedium
GN增菌液 Gram Negative Enrichment Broth 主要用于志贺氏菌的增菌培养,亦可用于沙门氏菌增菌培养(GB标准)
HAT混合盐 HAT Media Supplement (50×) Hybri-Max? 1vail γ射线灭菌
PYG液体培养基250g/瓶用于双歧杆菌乙酸和乳酸代谢物测定,每培养基中添加30支2incubationmediaPYG液体培养基250g/瓶用于双歧杆菌乙酸和乳酸代谢物测定,每培养基中添加30支21319
m-EndoAgar,LES
注意事项: