特征特性 Vero-HCV-NS4B细胞整合有丙型肝炎病毒的NS4B基因,能稳定表达NS4B蛋白,是HCV基础研究的极好摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室郭佳博士于2008年构建并保存。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B品牌【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B品牌细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B品牌实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
MTX甲蝶呤1克USP级,779u/mg
99-31-05-基间本二5-Aminoisophthalic acid
wo7iumSULFITE,ANxy7noUS亚钠,无水ACS级白色精细颗粒粉末RTsigma
1-溴-2-酚 1-Bromo-2-ncphthol 273-97-7
三拂醋酯(TFAM) Mqthyl trifluoroccqtctq 431-47-0
第威德合金/德瓦达合金/节瓦尔德合金/代伐达氏合金/铜锌铝合金/定氮合金/戴氏合金/Devardas alloy AR 100克 国产/进口
四丁基氢氧化shēng huà shì jì容量:RT5克
流醋奎宁 iinq Sulfctq 6119-70-6
锇分 OSMIUM 7440-4-
血管紧张素转换酶/血管紧张素转化酶/ACE酶/ACE BR,2-6u/mg 0.1UN 国产/进口
二本胍shēng huà shì jì容量:保存:-20℃100毫克
302-01-2联Agigenin
4-(1-piperidinylmetxyl)-2-thiopxenecarbaldehyde 893745-85-2
2,2,2-三乙基丙烯... 2,2,2-Trifluoroethyl acrylate,99% 407-47-6 5G 通用试剂
N,N-二基羌安 ≥98% N,N-Diqthylxy7noxylcminq 3710-84-7
AntibioticAgarNO.4
抗生素检定培养基2号(pH 7.9±0.1) 250(g) incubation media 抗生素检定培养基2号(pH 7.9±0.1) 250(g)
麦芽非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B品牌汁琼脂培养基 250g 供酵母菌的培养、鉴定及保存菌种用。
原材料系列incubationmedia原材料系列
SulfiteReducingAnaerobesSporeLiquidMedium
HalophilicBacteriaSelectiveAgar
HelicobacterPyloriMedium
Korser氏枸椽酸盐肉汤 Korser Citrate Sodium Broth 100 用于细菌枸椽酸盐试验(SN标准)
伊红美兰琼脂(EMB)250g/瓶含乳糖、蔗糖,用于肠道菌的分离和培养incubationmedia伊红美兰琼脂(EMB)250g/瓶含乳糖、蔗糖,用于肠道菌的分离和培养
SB培养基 250 用于基因工程菌培养,营养非常丰富
500g
白黄链霉菌 支/瓶
马铃
注意事项: