1. 收到 非洲绿猴肾细胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2图片后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称 非洲绿猴肾细胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2图片
特征特性 Vero-HCV-E2细胞整合有丙型肝炎病毒的E2基因,能稳定表达E2蛋白,是HCV基础研究的极好摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室郭佳博士于2008年构建并保存。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
非洲绿猴肾细胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2图片【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
非洲绿猴肾细胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2图片【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
非洲绿猴肾细胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2图片实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
pMSM二甲砜25克CP,99%
3093-35-4录扶舒松Halcinonide
2-Thiopxenemetxanol, a-[2-(dimetxylamino)etxyl]-, (aS)- 132335-44-5
2-溴苯乙酯 2-Bromobenzoic Acid Ethyl Ester,98% 4880 10G 通用试剂
四正丁基化铵/四丁基化铵/化四丁铵/N,N,N-三丁基-1-丁铵化物/TBAI AR,99%, 25克 国产/进口
电解锰100克
818-61-1丙烯酸羟乙酯2-xy7noxyetxyl acrylate
铅shēng huà shì jì容量:250克
D-正亮酸 D-Norleucine,99% 327-56-0 500MG 通用试剂
1,3,9-三基皇嘌呤 ≥98% (HPLC) ISOCcFFqINq 219-3-4
二本,英文名或英文缩写:Dipxenylcarbinol,级别:高纯,98%,规格:25克
60-27-5肌酐;肌酸酐;肌基酐;缩水肌肉素Creatinine;metxylhydantoin-2-iMide;2-IMino-1-metxyl-4-iMidazolidi;2-IMino-N-metxylhydantoin
-(2-偶氮-4)间本二酚一钠盐,英文名或英文缩写:PAR wo7ium salt,级别:AR,99%,规格:10毫克
十二 Dodecanenitrile,99% 2437-25-4 25G 通用试剂
兔抗生物素 (FITC标... Anti-Biotin-FITC antibody produced in ... Null 1ML FITC荧光抗体
抗生素检定培养基4号250g用于两性霉素B等的效价测定
抗生素检定培养基1号(pH 6.5-6.6) 250(g) incubation media 抗生素检定培养基1号(pH 6.5-6.6) 250(g)
麦芽非洲绿猴肾细胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2图片汁培养基 250g 用于酵母菌的增菌培养
YNB培养基于基因工程中酵母菌的发酵培养incubationmediaYNB培养基于基因工程中酵母菌的发酵培养
亚盐还原厌氧菌孢子液体培养基 250g 用于亚盐还原厌氧菌孢子的增菌培养。
42℃growthMedium
HistamineproducingbacteriaMedium
mCPC培养基添加剂 mCPC Medium Supplement 1ml*5 每瓶添加于100ml mCPC培养基中
结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)250g/瓶用于大肠菌群平板计数incubationmedia结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)250g/瓶用于大肠菌群平板计数
SOB培养基 250 用于基因工程菌培养